[지재 판결문] 특허법원 2022허5416 - 거절결정(특)

[지재] 특허법원 2022허5416 - 거절결정(특).pdf

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- 1 -
특 허 법 원
제 부
판 결
사 건 허 거절결정 특2022 5416 ( )
원 고 A
일본국 
대표이사 일본국인 B
소송대리인 변리사 이원희 배재광, 
피 고 특허청장
소송수행자 김병숙
변 론 종 결 2023. 8. 24.
판 결 선 고 2023. 10. 19.
주 문
1. 원고의 청구를 기각한다.
2. 소송비용은 원고가 부담한다.
청 구 취 지
특허심판원이 원 호 사건에 관하여 한 심결을 취소한다2022. 8. 19. 2022 774 .
- 2 -

이 유
1. 기초사실
가. 원고의 이 사건 출원발명 갑 제 호증( 2 )
1) 발명의 명칭: 섬유화 조직 1)으로부터 정상 조직을 재생하기 위한 조성물
2) 국제출원일 분할출원일 번역문제출일 우선권주장일 분할출원번호 원출원번호/ / / / / : 
및 제2011. 8. 5./ 2021. 8. 4./ 2013. 2. 25./ 2010. 8. 5. 2010. 10. 12./ 10-2021-7024745
호 제 호/ 10-2013-7004671
3) 청구범위 자 보정 반영(2021. 10. 21. )
청구항 1【 】콜라겐2)의 생산 또는 분비를 저해하는 HSP3) 에 대한 47 siRNA4)가 담지된 
레티노이드 결합 리포솜 구성 담체를 포함하고 상기 레티노이드는 콜라겐 생산 세포, 
에 를 특이적으로 전달하며 섬유화 간이 섬유화 자극을 계속 받고 있는 동안 섬siRNA , 
유화 간에 축적된 콜라겐의 감소로 형성된 공간에서 줄기세포의 성장 및 분화에 의해 
1) 조직의 섬유화는 콜라겐을 중심으로 하는 세포 외 매트릭스가 조직에 과도하게 생산 축적되는 것에서 생긴다갑 제 호증의 ( 2․
식별번호 참조[0003] ).
출처 더메디컬 기획기사 간경변 < : 2023. 6. 20. >
2) 콜라겐은 동물의 뼈와 피부에 주로 존재하며 연골 장기 막 머리카락 등에도 분포되어 있는 경단백질로 교원질이라고도 하 , , 
며 섬유상 고체로 존재하고 세 개의 폴리펩티드 사슬이 꼬여 있는 삼중나선형 구조로 특히 하이드로프롤린의 함량이 많은 , , 
단백질이다네이버 지식백과 두산백과 참조( ).
3) Heat Shock Protein
4) 간섭 현상은 표적 유전자의 침묵을 통해 타겟 유전자의 발현을 억제하는 방법이고RNAi(RNA interference, RNA ) , 
는 염기쌍 길이의 이중나선 로서 화학적 합성 방법으로 제조된 외부 유래 siRNA(small interference RNA) 19-21 dsRNA( RNA)
물질이며 인위적으로 세포 내로 도입되어 특정 유전자 발현을 제어하여 다양한 세포의 기능 분화 증식 및 사멸에 관여한다, , , 
한국분자 세포생물학회 웹진 년 월호 침묵 유전자 치료제 참조( 2018 2 ). ․
- 3 -
인간 개체 내 섬유화 간으로부터 정상 간을 재생시키기 위한 약학적 조성물로서 상기 , 
조성물은 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 간을 갖고 있는 인간 개체 섬유화 (1), 
간으로부터 정상 간의 재생이 필요한 인간 개체 및 섬유화 간으로 인한 알부민 발(2) 
현 레벨 감소를 겪는 인간 개체 에 투여하기 위한 것이고 상기 인간 개체는 장기 이(3) , 
식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자이고 및 상기 조성물은 줄기세포를 섬유화 간의 ; 
정상 조직세포로 분화시키기 위한 것이고 간의 알부민 발현 레벨을 증가시키기 위한 , 
것을 특징으로 하는 약학적 조성물 이하 이 사건 제 항 발명이라 하고 나머지 청구, ( ‘ 1 ’
항도 같은 방식으로 부른다).
청구항 2【 】제 항에 있어서 상기 레티노이드는 섬유화 간에서 콜라겐 생산 세포에 1 , 
대한 표적화제인 약학적 조성물, .
4) 발명의 주요 내용
별지 과 같다 1 .
나. 선행발명5) 을 제 호증( 1 )
전기통신회선으로 공개된 2008. 3. 30. Nature Biotechnology, Vol. 26, No. 4, pp. 
에 게재된 콜라겐 특이적 샤페론에 대한 를 비타민 가 결합된 리포솜431-442 ‘ - siRNA A
을 사용하여 전달하는 간경변증 회복(Resolution of liver cirrhosis using vitamin 
A-coupled liposomes to deliver siRNA against a collagen-specific chaperone) 에 관한 ’
것으로 주요 내용은 별지 와 같다, 2 .
다. 이 사건 심결의 경위
1) 특허청 심사관은 원고에게 이 사건 제 항 발명은 그 발명이 속한 2021. 9. 1. ‘ 1, 2
5) 특허청 심사단계에서 언급된 비교대상발명 에 해당한다 2 .
- 4 -
기술분야에서 통상의 지식을 가진 사람 이하 통상의 기술자라 한다 이 비교대상발명 ( ‘ ’ ) 16) 
또는 의 결합에 의해 쉽게 발명할 수 있어 진보성이 부정되므로 특허법 제 조 제 항에 2 29 2
따라 특허를 받을 수 없다 는 거절이유가 담긴 의견제출통지를 하였다.‘ . 
2) 원고는 이 사건 출원발명의 청구항 일부를 보정하였으나 특허청 심2021. 10. 21. , 
사관은 해당 보정에도 불구하고 이 사건 출원발명은 자 의견제출2022. 1. 5. 2021. 9. 1.
통지서에 기재된 거절이유를 해소하지 못하였다는 이유로 이 사건 출원발명에 대하여 특
허거절결정을 하였다.
3) 원고는 특허심판원에 해당 거절결정의 취소를 구하는 거절결정불복심2022. 4. 5. 
판을 청구하였다 이에 특허심판원은 해당 심판청구를 원 호로 심리한 다음. 2022 774 , 
2022. 8. 19. ‘이 사건 출원발명은 통상의 기술자가 선행발명에 의하여 쉽게 발명할 수 있
어 진보성이 부정되므로 특허법 제 조 제 항에 따라 특허를 받을 수 없다 는 이유로 원29 2 .’
고의 심판청구를 기각하는 심결 이하 이 사건 심결이라 한다 을 하였다( ‘ ’ ) .
2. 당사자의 주장
가. 원고
다음과 같은 이유로 이 사건 출원발명은 선행발명에 의해 진보성이 부정되지 않는 
다 따라서 이와 결론이 다른 이 사건 심결은 위법하다. .
1) 이 사건 출원발명은 투여대상이 장기 이식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자의 
콜라겐 분비 억제에 의한 간 섬유화 억제뿐만 아니라 정상조직으로의 재생 효과에 관한 
것으로서 선행발명과 상이한 질병에 대한 의약용도를 제공하는 것이다. 
2) 이 사건 출원발명은 지속적인 섬유화 자극을 받고 있는 섬유화 조직에서 섬유화 
6) 비교대상발명 은 공개된 공개특허공보 제 호에 게재된 섬유화 억제를 위한 약물 담체 및 약물 담 1 2007. 7. 4. 10-2007-97495 “
체 키트 에 관한 것인데 해당 발명은 심사 단계에서만 인용되고 이 사건 소송에는 제출되지 않았다” , .
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조직 분해 및 콜라겐 제거 효과를 나타내므로 선행발명에 비해 현저한 효과가 있는 것이
고 줄기세포를 통한 정상 조직 세포로의 분화 및 정상 조직 재생은 선행발명의 간 섬유, 
화 조직의 회복과 대비하여 이질적인 효과를 나타내는 것이다.
나. 피고
다음과 같은 이유로 이 사건 출원발명은 선행발명에 의해 진보성이 부정된다 따라 . 
서 이와 결론이 같은 이 사건 심결은 적법하다.
1) 선행발명은 담관 결찰 유도 모델과 유도 모델 등을 대상으로 시행된 연구이DMN 
고 이는 이 사건 제 항 발명이 대상으로 한 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 간과 , 1
실질적으로 다를 바 없다.
2) 선행발명과 이 사건 출원발명은 적용 대상이 간 섬유화 환자라는 점에서 실질적으
로 동일하다 이 사건 출원발명의 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 간이 선행발명. ‘ ’
과 달리 특별한 의미가 있다거나 이 사건 출원발명의 유효성분이 장기 이식만으로 치료, 
될 수 있는 중증 간 섬유화 환자에게 특별한 작용 효과가 있다고 보기 어렵다. 
3) 선행발명과 이 사건 출원발명은 실질적으로 같은 약물 조성물을 투여함으로써 섬
유화 영역을 감소시키고 정상 간 구조로 복원시키는 동일한 작용효과를 나타낸다 이 사. 
건 제 항 발명이 선행발명에 비해 통상의 기술자가 예측할 수 없는 이질적이거나 양적으1
로 현저한 효과가 있다고 볼 수 없다.
3. 이 사건 심결의 위법 여부
가. 이 사건 제 항 발명의 진보성 부정 여부1
1) 기술분야 및 목적의 대비
이 사건 제 항 발명은 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생 하기 위한 약물 1 “ ”
- 6 -
조성물에 관한 것이다 식별번호 이 사건 출원발명은 섬유화 조직으로( [0001], [0007]). “
부터 정상 조직을 재생 하는 것의 기술적 의의를 다음과 같이 정의하고 있다“ .
해당 기재에 의하면 이 사건 제 항 발명에서 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 , 1 ‘
재생하는 것의 기술적 범위는 섬유화가 보다 경도인 상태로 회복시키는 것 섬’ , ① ② 
유화의 흐름을 역전시킴으로써 증식한 섬유 조직을 본래의 정상 조직으로 치환해 가는 
것 섬유화 조직에 축적된 콜라겐의 감소에 의해 생성된 공간에서 줄기세포가 증, ③ 
식 분화하여 정상 조직을 재생하는 것을 포함하는 것으로 해석된다. ․
이에 대응하여 선행발명은 간 섬유화 조직의 생성 억제 및 분해 촉진을 통해 정
상적인 간 구조로 회복할 수 있다는 것으로서 초록 면 제 단락 이 사건 출원발명( , 436 2 ), 
에 정의된 정상 조직의 재생 중 과 에 직접 대응되고 뒤에서 살펴볼 바와 같이 ‘ ’ , ① ②
역시 선행발명에 암묵적으로 내재되어 있다③ . 
이 사건 출원발명 갑 제 호증( 2 )
[0050] 본 발명에 있어 「섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생한다」는 섬유화에 의해서 변
질한 조직을 적어도 섬유화가 보다 경도인 상태로 회복시키는 것, 을 의미한다 즉 섬유화가 . , 
진행되는 것에 따라 조직은 세포 외 매트릭스를 중심으로 한 섬유 조직으로 치환되어 가지, 
만, 이 흐름을 역전시켜 증식한 섬유 조직을 본래의 정상 조직으로 치환해 가는 것이 본 발, 
명에서 섬유화 조직으로부터의 정상 조직의 재생이다 따라서 본 발명에서 . , 섬유화 조직으로
부터의 정상 조직의 재생은 섬유화 조직을 완전하게 원 상태로 회복시키는 것뿐만 아니라, 
섬유화 조직을 부분적으로 원래 상태에 회복시키는 것도 포함한다 후략. ( ) 
본 발명의 [0051] 한 형태에 있어서 정상 조직의 재생은 섬유화 조직에 축적된 콜라겐의 감
소에 의해 생성된 스페이스에 있어 줄기세포가 증식 분화하는 것으로 생기는 것, · 이어도 좋다. 
따라서 본 발명의 한 형태는 섬유화 조직에 축적된 콜라겐이 감소되어 생성되는 줄기세포, , 
의 증식 분화용의 스페이스에 있어 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생하기 위한 상기 · , 
의약 조성물에 관한 것이다 후략. ( )
- 7 -
따라서 양 발명은 간 섬유화 치료제에 관한 것이라는 점에서 기술분야가 동일하
고 섬유화 조직의 재생을 통해 섬유화가 존재하는 조직을 치료하여 정상적인 간 기능, 
을 할 수 있는 조성물을 제공한다는 점에서 발명의 목적이 공통된다. 
2) 이 사건 제 항 발명과 선행발명의 구성요소 대비1
이 사건 제 항 발명의 구성요소를 대비하기 쉽게 재구성하여 선행발명의 대응 구 1
성요소와 대비하면 다음과 같다.
구성
요소
이 사건 제 항 발명1 선행발명
1
유효(
성분)
콜라겐의 생산 또는 분비를 저해하는 
에 대한 가 담지된 레티노이HSP47 siRNA
드 결합 리포솜 구성 담체를 포함하고, 
상기 레티노이드7)는 콜라겐 생산 세포에 
를 특이적으로 전달하며siRNA ,
◦콜라겐의 생산 또는 분비를 저해하는 
인간 의 래트 상동체 에 대gp46( HSP47 )
한 가 담지된 레티노이드 결합 리siRNA
포솜 구성 담체(VA8)-lip-siRNAgp46) 초 [
록 면 우측 칼럼 등, 431 ]
는 콜라겐 생산세포 간 성상Vitamin A (◦
세포 세포 에 ; HS , Hepatic Stellate Cell)
를 특이적으로 전달함 면 좌siRNA [433
측 칼럼]
2
투여(
대상)
상기 조성물은 섬유화 자극을 계속 받고 
있는 섬유화 간을 갖고 있는 인간 개체
섬유화 간으로부터 정상 간의 재생이 (1), 
필요한 인간 개체 및 섬유화 간으로 (2) 
인한 알부민 발현 레벨 감소를 겪는 인간 
개체 에 투여하기 위한 것이고(3) ,
상기 인간 개체는 장기 이식만이 치료법
인 중증 간 섬유화 환자이고;
간경변증 동물 모델[DMN◦ 9) 유도 , CCl4 
유도 담관 결찰, (BDL10) 유도 에서 콜라) ]
겐 합성 억제에 의해 간 경변을 역전할 
수 있고 재생능이 시사됨 면 우측 , [439
칼럼]
유도 모델은 진행성 및 치명적 - DMN 
섬유증 유발하므로 주 연구 모델로 선
택하였다고 기재
- CCl4 유도 모델은 치명적이지 않고 
모델보다 경미한 특징의 섬유증 DMN 
모델로 기재
- 8 -
7) 레티노이드 는 개의 이소프레노이드 단위가 헤드 투 테일 식으로 연결한 골격을 가지는 화 (retinoid) 4 (isoprenoid) - - (head-to-tail)
합물 군의 일원이며 비타민 는 레티놀 의 생물학적 활성을 정상적으로 보이는 레티노이드의 일반적인 기술자, A (retinol) (記述
이다식별번호 ) ( [0054]).子
8) 비타민 의 약어이다 A(Vitamin A) . 
9) Dimethylnitrosamine
10) 담관 결찰 담관을 묶어 폐쇄성 황달을 유발하여 담즙정체성 간경변증을 유발하는 모델이다을 제 호증Bile Duct Ligation ( ) : ( 4 ).
담관 결찰 유도 모델은 담즙 역류로 - 
인한 만성적인 연속 자극에 의해 간경
변증을 유도하는 동물 모델로 기재 
래트에서 DMN ◦ VA-lip-siRNAgp46 치료 
일에 알부민 수준이 거의 또는 완전70
히 정상적인 수준임이 확인됨 면 좌[437
측 칼럼 도입부 및 면 우측 칼럼 439
하단]
간경변증 또는 섬유증은 모든 형태의 ◦
만성 간 손상에서 최종적인 병리학적 
특징으로 전 세계적으로 이환율과 사, 
망률에 많은 영향을 미침 면 좌측 [431
칼럼 도입부]
3
의학(
용도)
섬유화 간이 섬유화 자극을 계속 받고 있
는 동안 섬유화 간에 축적된 콜라겐의 감
소로 형성된 공간에서 줄기세포의 성장 
및 분화에 의해 인간 개체 내 섬유화 간
으로부터 정상 간을 재생시키기 위한 약
학적 조성물로서 상기 조성물은 , 줄기세
포를 섬유화 간의 정상 조직세포로 분화
시키기 위한 것이고 간의 알부민 발현 , 
레벨을 증가시키기 위한 것을 특징으로 
하는 약학적 조성물, 
간경변증 동물 모델 유도(DMN , CCl◦ 4 
유도 담관 결찰 유도 에서 축적된 , (BDL) )
콜라겐의 감소 효과 확인
세포의 콜라겐 합성 억제와 동시 - HS 
에 콜라게나제에 의한 축적된 콜라겐 
분해
세포자멸사에 의해 콜라겐 생성 - HS 
세포 감소
프로콜라겐 생성 억제 - I mRNA 
간경변증 치료 후 간이 거의 완전히 정◦
상적인 간 구조로 복원되어 간 조직의 
재생능이 시사됨 면 우측 칼럼 하[439
단]
알부민 수준이 정상 수준으로 회복됨◦
- 9 -
3) 공통점 및 차이점 분석
가) 구성요소 1
(1) 구성요소 은 약학 조성물의 유효성분을 콜라겐의 생산 또는 분비를 저해하1 ‘
는 에 대한 가 담지된 레티노이드 결합 리포솜 구성 담체를 포함하고 상기 HSP47 siRNA , 
레티노이드는 콜라겐 생산세포에 를 특이적으로 전달하기 위한 것으로 한정한 것siRNA ‘
이다 이에 대응하여 선행발명에는 인간 의 래트 상동체인 에 대한 를 . HSP47 gp46 siRNA
비타민 가 결합된 리포솜 구성 담체에 넣어 캡슐화화는 방법이 개시되어 있고 콜라겐 A , 
생산 세포인 간 성상 세포 세포 가 콜라겐 생성에 의해 섬유화에 주요 역할을 하면서(HS )
도 비타민 를 흡수 및 저장하는 기능을 하는 점을 이용하여 와 비타민 를 결합A siRNA A
할 경우 의 세포에 대한 표적화가 가능한 것을 확인하는 실험데이터도 기재되siRNA HS 
어 있다 초록 과 의 결합 확증 섹션 참조( , VA-lip-siRNAgp46 RBP ). 
(2) 양 발명의 대응 구성은 세포에 를 전달하려는 목적으로 레티노이드HS siRNA
비타민 를 이용하고 레티노이드 비타민 가 결합된 리포솜 형태의 담체에 를 [ A] , [ A] siRNA
넣는 점에서도 기술 구성이 동일하다 다만 구성요소 이 인간 에 대한 를 . , 1 HSP47 siRNA
이용하는 구성인 반면 선행발명은 래트 에 대한 를 이용한 연구이기는 하나, gp46 siRNA , 
선행발명에는 인간 에 대한 래트 상동체인 을 이용하였다는 사실이 기재되어 HSP47 gp46
있고 면 참조 이 사건 출원발명은 구체적인 실시예에서 선행발명과 마찬가지로 인[439 ], 
간 의 래트 상동체인 에 대한 를 이용하고 있다 식별번호 참조HSP47 gp46 siRNA ( [0090] ). 
따라서 양 발명의 대응 구성은 에 관한 문언상 차이만 있을 뿐 실질적으로 동일하HSP47
다 이에 대하여 당사자 사이에 다툼이 없다( ). 
나) 구성요소 2
- 10 -
구성요소 는 투여 대상을 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 간을 갖고 2 ‘
있는 인간 개체 섬유화 간으로부터 정상 간의 재생이 필요한 인간 개체 및 섬유(1), (2) 
화 간으로 인한 알부민 발현 레벨 감소를 겪는 인간 개체 상기 (3)’, ‘ 인간 개체는 장기 
이식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자 등 여러 특성의 조합으로 한정한 것’ 이다 구. 
성요소 가 한정한 투여 대상을 선행발명의 대응 구성과 순차 대비하면 다음과 같다2 .
(1) 인간개체 의 대비(1)
다음과 같은 이유로 인간개체 은 선행발명의 대응구성과 실질적으로 동일 (1)
하다.
가( ) 선행발명에는 본 연구의 양상이 담즙 역류로 인한 만성적인 연속 자극에 “
의해 유발된 간경변증에도 효과적인지 확인하기 위하여 담관결찰술(bile duct ligation, 
을 받은 래트 를 대상으로 BDL) ” VA-lip-siRNAgp46을 투여한 결과 유의미한 효과가 있었
다는 내용이 기재되어 있다 을 제 호증 면 선행발명은 담관결찰술을 받은 래트를 간 ( 1 437 ). 
섬유화 자극이 계속되는 모델로서 의 VA-lip-siRNAgp46 투여 대상으로 하였다. 
나( ) 나아가 이 사건 출원발명은 섬유화 자극을 계속 받고 있는 간 조직으로서 ‘ ’
담관 질환 등에 의해 담즙의 울체가 일어나고 있는 간 조직 을 예로 들고 있고 식별번호 “ “ (
실시예 에서는 담관 결찰 래트 모델 을 대상으로 을 투여하[0049]), 2 “ ” VA-lip-siRNAgp46
는 실험을 시행하면서 해당 모델에 관하여 담관 결찰에 의해 담즙의 울체가 생겨 간 조“
직이 섬유화 자극에 계속적으로 노출된 상태가 된다 라고 설명하고 있다 식별번호 .” (
이 사건 출원발명의 간 섬유화 자극을 계속 받고 있는 간 조직에 대한 구체적인 [0103]). ‘ ’
실시예에서 이용한 모델은 선행발명의 실험 모델 중 하나와 실질적으로 동일한 것이다.
다( ) 선행발명은 DM 유도 모델을 N 을 투여하는 주요 연구 VA-lip-siRNAgp46
- 11 -
모델로 삼고 해당 모델에서 확인한 효과를 사염화탄소(CCl4 유도 모델이나 담관 결찰 유) 
도 모델에 대한 투여 결과와 비교하는 방식으로 연구를 수행하였다 이에 대하여 원고는 선. 
행발명의 유도 모델에 대한 실험은 처리를 중단한 이후 DMN DMN VA-lip-siRNAgp46을 
투여한 실험이므로 해당 실험은 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 간에 대한 연구에 , 
해당하지 않는다고 주장한다 그러나 다음과 같은 이유로 선행발명의 유도 모델에 . DMN 
대한 실험 역시 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 간을 투여대상으로 한 연구에 해’ ‘
당한다고 보는 것이 타당하다.
① 선행발명에서 유도 모델에 DMN VA-lip-siRNAgp46과 대조군 약물을 투
여하여 생존율을 비교한 결과를 나타내는 아래 그림을 보면 선행발명에서 처리 기, DMN 
간과 이 투여된 기간은 상당 기간 중복되는 것으로 보인다VA-lip-siRNAgp46 .
을 제 호증 면1 435
② 또한 선행발명에는 , “The reversibility of liver cirrhosis was examined 
- 12 -
in liver specimens from day 47 and day 70 rats that stopped receiving DMN and 
VA-lip-siRNAgp46 treatments at day 44 and day 46, respectively. Near-specimens 
from day 47 and day 70 rats, indicating the regeneration capacity of liver tissue.”(436
면 라고 기재되어 있다 해당 기재에 의하면 선행발명은 과 ) . , DMN VA-lip-siRNAgp46의 
투여를 각각 일째와 일째 중단한 래트의 검체를 확인하여 간조직의 가역성을 확인44 46
하였다는 것이므로 처리와 , DMN VA-lip-siRNAgp46 투여는 상당기간 함께 이루어진 것 
으로 보인다.
③ 더욱이 이 사건 출원발명은 섬유화 자극을 섬유화를 유도하는 임의의 ‘ ’ “
자극 이라 정의하면서 산화 스트레스 저산소 상태 염증 세포사멸 등을 포함 한다고 할 ” “ , , , ”
뿐 섬유화 자극을 특정 자극으로 한정하고 있지 않다 식별번호 또한 이 사건 ‘ ’ ( [0049]). , 
출원발명이 들고 있는 섬유화 자극의 예시에 비추어 볼 때 섬유화 자극의 지속 여부는 , ‘ ’ 
특정 물질의 투여가 계속되는 것뿐만 아니라 그러한 투여에 의한 결과가 계속되는 것 등
을 포함하여 임의의 섬유화 자극이 지속되는 것으로 해석하는 것이 합리적이다‘ ’ . 
④ 그런데 은 간세포 괴사 간 섬유증 및 간경변증 등을 유발하는 물질DMN , 
로서 을 끊어도 조직 소견이 불변하거나 오히려 더 진행한다는 것은 이 사건 출원발DMN
명이 속한 기술분야에서 우선일 당시 널리 알려진 사실이다 을 제 호증 이는 간 섬유( 3, 4 ). 
증 및 간경변증을 유도하기 위해 이전에 투여된 으로 인해 개시된 생체 내 염증DMN ‘ ’, 
산화 스트레스 세포 사멸 등 임의의 섬유화 자극이 의 투여가 중단되어 이 ‘ ’, ‘ ’ ’ ‘ DMN DMN
해당 조직에 존재하지 않더라도 지속되기 때문이다.
(2) 인간개체 의 대비(2)
인간개체 는 (2) ‘섬유화 간으로부터 정상 간의 재생이 필요한 개체로 투여 대’ 
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상을 한정한 것인데 이 사건 제 항 발명의 목적 대비에서 살핀 바와 같이 선행발명도 , 1
섬유화 간을 치료하기 위해 정상 간을 재생하는 것을 개시하고 있다 양 발명의 대응 . 
구성은 실질적으로 동일하다.
(3) 인간개체 의 대비(3)
인간개체 은 섬유화 간으로 인한 알부민 발현 레벨 감소를 겪는 개체로 (3) ‘ ’ 
한정하고 있다 그런데 간세포가 손상되어 섬유화될 경우 간 실질세포가 정상 간에 비. 
해 감소되면서 단백질 합성 기능이 저하되고 그 결과 알부민 단백질의 합성 역시 감, 
소하게 된다 알부민의 감소는 대부분의 중증 간 섬유증 및 간경변증에서 흔히 보이는 . 
병태 생리적 특성이고 이 때문에 알부민은 간 실질세포의 마커로서 식별번호 , ( [0122]) 
역할을 하게 된다 이는 이 사건 출원발명이 속한 기술분야에 널리 알려진 사실이므로. , 
통상의 기술자는 간 섬유화와 알부민 발현 레벨 감소의 관계를 쉽게 파악할 수 있다. 
나아가 선행발명에도 알부민 양성 세포 간세포 라는 기재가 있고 면 에 의해 ‘ - ( )’ (433 ), DMN
간경변증을 유도한 래트 모델에서 VA-lip-siRNAgp46 치료 일 경과 시점에서 알부민 70
수준을 의 효과를 확인하는 지표로 삼은 실험 데이터도 기재되어 있VA-lip-siRNAgp46
다 참고자료 그림 참조 따라서 양 발명의 대응 구성은 실질적으로 동일하다( 6 ). .
(4) 장기 이식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자의 대비‘ ’
구성요소 는 2 을 투여할 수 있는 환자군으로VA-lip-siRNAgp46 장기 이식만 ‘
이 치료법인 중증 간 섬유화 환자로 추가 한정하고 있는 반면 선행발명에는 ’ , VA-lip-s
의 투여 대상으로 iRNAgp46 간 섬유증 또는 간경변증 환자만 기재되어 있는 점에서 차
이가 있다 이하 ( 차이점 ‘ 1’이라 한다).
다) 구성요소 3
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(1) 구성요소 은 의약용도를 섬유화 간이 섬유화 자극을 계속 받고 있는 동안 섬3 ‘
유화 간에 축적된 콜라겐의 감소로 형성된 공간에서 줄기세포의 성장 및 분화에 의해 인
간 개체 내 섬유화 간으로부터 정상 간을 재생시키기 위한 약학적 조성물로서 상기 조성, 
물은 줄기세포를 섬유화 간의 정상 조직세포로 분화시키기 위한 것이고 간의 알부민 발, 
현 레벨을 증가시키기 위한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물로 한정한 것이다’ .
이에 대응하여 선행발명에는 다양한 간 섬유증 모델에 을 투 VA-lip-siRNAgp46
여한 결과 콜라겐 합성의 억제 및 분해 콜라겐 생성 세포의 감소 등으로 간 조직 내 , 
콜라겐 감소와 함께 간 섬유증 회복 효과가 나타났고 간경변증을 겪던 간이 치료 후 , 
거의 완전히 정상적인 간 구조로 복원되는 것을 보였으며 위와 같은 실험 결과는 간, 
조직의 재생능을 시사한다는 내용이 기재되어 있다.
(2) 또한 앞서 구성요소 에서 살펴본 바와 같이 이 사건 제 항 발명의 섬유화 , 2 1
자극을 계속 받는 섬유화 간과 선행발명에 개시된 간 섬유증 모델은 실질적으로 동일하
고 간 섬유증과 간경변증을 겪는 간이 정상 간으로 회복되면 알부민 발현 레벨이 증가한, 
다는 것은 주지관용기술에 해당할 뿐만 아니라 선행발명에도 개시되어 있다 따라서 양 . 
발명의 대응 구성은 섬유화 자극을 계속 받는 섬유화 간 내 콜라겐을 감소시켜 섬유화 
간을 정상 간으로 재생시키는 약학 조성물이라는 점에서는 실질적으로 동일하다. 
(3) 다만 선행발명은 을 투여한 결과 정상적인 간 구조가 회복VA-lip-siRNAgp46
되어 간의 재생능이 시사된다고 기재되어 있을 뿐 그와 같은 간의 재생이 줄기세포의 , ‘
성장 및 분화에 의한 것으로 기재하고 있지 않은 점에서 차이가 있다 이하 ’ ( 차이점 ‘ 2’라 
한다).
4) 차이점 검토
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가) 차이점 장기 이식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자1 - ‘ ’
다음과 같은 이유로 통상의 기술자는 선행발명으로부터 차이점 을 쉽게 극복 1
할 수 있다고 보는 것이 타당하다.
(1) 선행발명은 간경변증 또는 섬유증은 모든 형태의 만성 간 손상에서 최종적인 , 
병리학적 특징으로 전 세계적으로 이환율과 사망률에 많은 영향을 미치고 현재 간경변, , 
증에 대해 승인된 항 섬유화 요법은 없다고 명시하고 있다 이 사건 출원발명이 속한 기. 
술분야에서 간 섬유증 및 간경변증 치료제가 없는 실정이었고 선행발명의 공개일 즈음, 
에 이르러서야 비로소 간 섬유화가 가역적 병리라고 인식되기 시작하였을 뿐이다 그 때. 
까지 진행성 만성 간질환 비대상성 간경변증 으로 인한 간 부전 치료법으로 확립된 방법( )
은 간 이식뿐이었고 장기 이식의 여러 문제점으로 인해 이를 대체할 수 있는 치료법을 
찾는 것이 이 사건 출원발명이 속한 기술분야의 오랜 해결 과제였다 을 제 호증 선행( 2, 7 ). 
발명의 공개일 시점에서 간경변증과 같은 중증 간 섬유화로 진단받은 환자에 대해 통상
의 기술자라면 치료법으로 당연히 간이식을 고려하였을 것으로 보인다 따라서 이 사건 . 
제 항 발명이 한정하고 있는 장기 이식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자가 선행발명1 ‘ ’
의 간경변증과 같은 중증 간 섬유화 환자와 대비하여 구별되는 새로운 환자군으로 보기 
어렵다.
(2) 대상 환자군이 한정된 발명은 그 의약물질이 가지는 미지 속성의 발견에 기초
하여 기존 치료제로 치료가 어려웠던 환자에게도 치료효과를 나타내는 새로운 쓰임새를 
제공하는 데 발명으로서 의의가 있다 특허법원 선고 허 판결 등 참( 2017. 2. 17. 2016 5026 
조 따라서 이 사건 출원발명에서 한정한 환자군이 발명의 구성요소 한정으로서 의미가 ). 
있기 위해서는 명세서에 약학 조성물의 해당 환자군에 대한 종전 약물과 다른 쓰임새를 , 
- 16 -
확인할 수 있는 내용이 기재되어 있어야 한다 그러나 이 사건 출원발명의 명세서에는 약. 
학 조성물을 해당 환자군에 적용한다는 아래 문언 이외에는 해당 환자군에 대한 치료효과
를 확인할 수 있거나 통상의 기술자가 그와 같은 효과가 있는 것과 마찬가지라고 이해할 , 
만한 내용이 기재되어 있지 않다.
(3) 이에 대하여 원고는 장기 이식만이 치료법인 중증 간 섬유화 환자란 간이 , ‘ ’
더는 기능하지 않는 사람을 의미하고 이러한 환자는 정상조직의 간이 필요한 환자이므, 
로 이 사건 제 항 발명은 섬유화가 많이 진행되어 간이 더는 기능하지 않는 환자군에 대, 1
한 약학 조성물의 쓰임새를 제공한 것인 반면 선행발명에서 간 조직의 재생능은 간이 기, 
능하는 간경변증 환자에서 일어나는 것을 의미하는 것으로 그 용도가 상이하고 이 사건 
출원발명의 명세서에는 정상 간의 재생 효과를 기재하고 있으므로 식별번호 ( [0116], 
선행발명의 환자군과는 차별화되는 새로운 대상군에 대한 의약용도를 제공하는 [0128]) 
것이라고 주장한다 그러나 다음과 같은 이유로 원고의 주장은 받아들이지 않는다. .
가( ) 이 사건 출원발명에 기재된 피험 래트는 실시예 에서 제작한 간 섬유화 2
모델 래트로서 식별번호 담관 결찰 유도 모델이고 식별번호 ( [0116], [0128]), ( [0103]), 해
당 간 섬유화 모델은 선행발명에 시험된 가지 동물 모델 중 하나와 같다3 그런데도 선행. 
발명의 실험 데이터는 간이 정상적으로 기능하는 간경변증 환자에 대한 것인 반면 이 , 
사건 제 항 발명은 간이 더는 기능하지 않는 개체에 대한 것으로서 서로 다르다고 보기1
이 사건 출원발명 갑 제 호증( 2 )
또한 본 발명에 의해 섬유화 자극에 계속적으로 노출되어 있는 섬유화 조직의 치 [0024] , 
료가 가능해지며 종래 유효한 치료법이 존재하지 않았던 섬유화 질환이나, 장기 이식밖에 치
료법이 없었던 섬유화 질환을 포함한 모든 섬유화 질환의 내과적 치료가 실현되기 때문에 
의료 및 수의학에 대한 지대한 공헌을 기대할 수 있다.
- 17 -
는 어렵다.
나( ) 동물 모델은 인간을 대상으로 약효를 검증하기 전에 안전성 측면에서 우
선적으로 효과를 확인하기 위해 주로 사용된다 동물 모델이 인간의 질병 상태를 완벽하. 
게 구현하는 경우는 거의 없고 상황에 따라 적절한 동물 모델을 선택하여 실험하고 이를 , 
토대로 인간에 대한 적용 가능성을 평가하는 것이다 이 사건 출원발명에서 구체적으로 . 
효과를 살펴본 담관 결찰 유도 모델이 장기 이식만이 치료법인 중증의 간 섬유화 환자를 ‘ ’
대표하는 동물 모델로 이 사건 출원발명이 속한 기술분야에 널리 인식되고 있었다는 사정
은 이 사건 출원발명의 명세서 어디에도 기재되어 있지 않고 달리 이를 인정할 증거도 없, 
다. 나아가 이 사건 출원발명의 명세서에 간 섬유화 모델 동물로 사염화탄소(CCl4 돼지 혈), 
청 디메틸니트로사민 메티오닌 코린 결핍식, (DMN), - (methionin-and cholinedeficient diet; 
콘카나바린 담관 결찰 등이 이용될 수 있다고 기재된 점MCDD), A(concanavalin A; ConA), 　
에 비추어 보더라도 식별번호 시험에 사용된 동물 모델이 한정된 유형의 간 섬유증 ( [0076]), 
모델을 대표하는 모델이라고 볼 수 없다.
다( ) 또한 원칙적으로 이 사건 출원발명과 선행발명에서 효과를 본 동물 모델 , 
중 하나가 담관 결찰 유도 모델로서 같은 이상 담즙의 울체로 인한 섬유화 자극에 계속적, 
으로 노출된 상태의 모델이라는 점에서도 차이가 있다고 볼 수도 없다 게다가 원고가 주. 
장하는 바와 같이 담관 결찰 유도 모델을 섬유화 자극의 지속에 의한 만성 간 섬유화 모‘ ’
델로 간주할 수 있다 하더라도 해당 모델의 간 섬유화 병리가 비알콜성 지방간염 유래 간 , 
섬유증 고지방 식이로 인한 간 섬유증 유도 간 섬유증의 병리를 적절하게 반영하여 , , DMN 
그러한 간 섬유증에서의 치료 효과를 예측할 수 있는 모델로 볼 근거도 없다.
이 사건 출원발명 갑 제 호증( 2 )
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라( ) 더욱이 선행발명은 가지 간 섬유증 동물 모델 중 주된 효과를 살펴본 3
유도 모델이 진행성 및 치명적인 섬유증이 유발되는 것으로 기재하고 있고 이 사DMN ‘ ’ , 
건 출원발명과 선행발명의 발명자가 동일한 점을 고려하면 원고도 유도 모델이 담, DMN 
관 결찰 유도 모델보다 더 치명적인 간 섬유증을 유발한다는 것을 인식하였을 것으로 보
인다 이 사건 출원발명의 실험 모델인 담관 결찰 유도 모델이 정상적인 간 기능을 하지 . 
않는 간 섬유화 모델이라거나 선행발명의 간 섬유화 모델은 정상적인 간 기능이 잔존하, 
고 있는 모델이라고 볼 수 없다.
마( ) 이 사건 출원발명과 선행발명이 담관 결찰 유도 모델에 실시한 약리효과 
평가 방법이 서로 다른 점11)은 인정되나 이 사건 출원발명에 선행발명이 구체적으로 개, 
11) 선행발명은 담관 결찰 유도 모델에서 처치에 의한 간 섬유화 개선을 콜라겐 염색인 아잔 염색 등을 하여 VA-lip-siRNAgp46 
대조군 대비 콜라겐 감소를 조직학적으로 평가하고 있는 것에 비해그림 참조 이 사건 출원발명은 담관 결찰 유도 모델( 6 ), 
[0005] 또한 조직의 섬유화에는 바이러스 감염 음주 약물 등에 유래하는 섬유증 등 병인, , , 
이 명확하고 그 제거가 가능한 것뿐만이 아니라 직접적인 병인이 불명한 섬유증 예를 들면, , , 
특발성 간경변 특발성 폐 섬유증 특발성 골수 섬유증 등 또는 직접적인 병인은 알고 있지, , , , 
만, 그 병인의 원인이 불명한 것이나 제거 곤란한 것, 예를 들면 방사성 발전성 담즙성 간경, , 
변, 비알코올성 지방간염 유래의 간 섬유증 원발성 경화성 담관염(NASH) , 등도 포함된다 이러 . 
한 병인의 제거가 곤란한 섬유화가 존재하는 조직은 끊임없이 섬유화 자극에 노출되어 있는 
상태에 있지만 해당 섬유화 조직에 대해 병적인 세포 외 매트릭스의 축적을 감소시킬 수 있, 
는 것도 더욱이 조직을 재생할 수 있는 것도 지금까지 전혀 알려지지 않았었다, .
전략 [0049] ( ) 또한 해당 조직에는 , 직접적인 병인이 불명한 섬유증 예를 들면 특발성 간, , 
경변 특발성 폐 섬유증 특발성 골수 섬유증 등 또는 직접적인 병인은 알고 있지만 그 병, , , , , 
인의 원인이 불명한 것이나 제거 곤란한 것 예를 들면 원발성 담즙성 간경변, , , , 비알코올성 
지방간염 유래의 간섬유증 원발성 경화성 담관염(non-alcoholic steatohepatitis;NASH) , , 특발 
성 폐 섬유증 특발성 간질성 폐렴 유래의 폐섬유증 원발성 골수 섬유증 특발성 간질성 신, , , 
장염 유래의 신장 섬유증 염증성 장질환 예를 들면 만성 크론병 궤양성 대장염 등 전신성 , ( , ), 
강피증 등으로 이환한 조직 등도 포함된다. 
- 19 -
시하지 않은 시험 데이터가 기재되었다는 사정만으로 동물 모델의 병리가 변경되어 해당 
모델을 정상적인 간세포가 기능하지 않는 간 섬유화 모델로 보기는 어렵다‘ ’ .
바( ) 위와 같은 사정을 종합하면 이 사건 제 항 발명에서 장기 이식만이 치료, 1 ‘
법인 중증의 간 섬유화 환자로 한정된 환자군은 선행발명과 차별화되는 새로운 환자군’
으로 볼 수 없으므로 구성요소 는 의약용도발명에 있어서 새로운 쓰임새를 제공하는 , 2
정도의 특별한 기술적 의의를 가진다고 볼 수 없다.
나) 차이점 2
다음과 같은 이유로 통상의 기술자가 선행발명으로부터 차이점 를 쉽게 극복 2
할 수 있다고 보는 것이 타당하다.
(1) 이 사건 출원발명에 기재된 줄기세포에 성장 및 분화에 의한 간의 재생은 이 ‘ ’
사건 제 항 발명의 유효성분인 만의 효과가 아니라 치료를 위해 별도1 VA-lip-siRNAgp46
로 이식한 간 줄기세포가 조합되어 나타나는 효과이다.
에서 처치 이전에 표지 래트 간 줄기세포를 먼저 이식한 후VA-lip-siRNAgp46 GFP 간 섬유증 개선 효과를 확인하고 있어 
서실시예 참조 구체적인 실시 태양이 상이하다 즉 이 사건 출원발명에 기재된 효과는 ( 2 ), . 단독의 효과VA-lip-siRNAgp46 
가 아니라 외부에서 치료학적으로 별도로 공급된 줄기세포가 조합된 효과인데 이러한 실시 태양의 차이로 동물 모델의 병, 
리학적 특성이 변경되는 것은 아니다. 
이 사건 출원발명 갑 제 호증( 2 )
[ 표지 래트 간 줄기세포의 제조0105] (2) GFP 
[0106] 표지 래트 간 줄기세포는 주령의 유전자 도입 래트 의 간에서 채GFP 4 GFP (Slc Japan)
취했다 중략 세포수를 센 후 결합 마우스 항 항체 래빗 폴리클. ( ) , FITC CD45 (BD Pharmingen), -
로날 항 항체 및 마우스 모노클로날 항(rabbit-polyclonal) CD133 (Abcam) (monoclonal) EpCAM 
항체 를 이용해 을 를 실시해 양성 양성 음성 세(Santa Cruz) MACS(R)( ) , CD133 , EpCAM , CD45 
포를 채취하여, 래트 간 줄기세포로서 본 실험에 이용했다.
간섬유화 모델 래트의 처리[0108] (3) 
상기 로 제작한 [0109] (1) 간섬유화 모델 래트에게 상기 로 제조한 표지 간 줄기세포, (2) GFP 
- 20 -
(2) 그런데 이 사건 제 항 발명은 이식된 줄기세포로 한정하고 있지 않고 줄기1 ‘ ’ ‘
세포로 기재하고 있으므로 발명의 설명을 참작하여 해당 문언의 기술적 의의를 객관적’
이고 합리적으로 고찰할 필요가 있다 이 사건 출원발명의 관련 기재는 다음과 같다. .
해당 기재에 의하면 줄기세포는 치료를 위해 별도로 투여한 줄기세포만을 의, 
미하는 것이 아니므로 이 사건 제 항 발명의 줄기세포는 섬유화한 간에 본래 존, 1 ‘ ’ ① 
재하거나 다른 조직에서 이동해 온 줄기세포와 치료적으로 이식한 줄기세포까지 ② ③ 
를 의 배지 속에 , 200 DME/F12 2×10㎕ 6개의 농도로 국소 이식했다.
[0128] 를 발현하는 세포는 이식한 간 줄기세포 유래의 세포GFP 이므로 의 , VA-lip-siRNAgp46
투여에 의해 세포 이식 부위에 있어서 섬유화 영역의 축소와 함께 간 줄기세포가 간실질 세, , 
포 담관 상피 세포 및 혈관 상피 세포로 분화하는 것으로써 정상적인 간 조직이 재생되는 , , 
것이 나타났다 즉 투여에 의한 치료는 간 섬유증의 치유뿐만 아니라 간. , VA-lip-siRNAgp46 , , 
재생도 유발하는 것이 분명해졌다 또한 투여군에서 간 줄기세포를 검. , VA-lip-siRNAscramble 
출할 수 없었던 것 도 은 에 의한 섬유화 영역의 축소가 간 줄기세포의 ( 3) , VA-lip-siRNAgp46
증식 및 분화에 깊게 관여하고 있는 것을 시사하고 있다. 
이 사건 출원발명 갑 제 호증( 2 )
[0051] 본 발명의 한 형태에 있어서 정상 조직의 재생은 섬유화 조직에 축적된 콜라겐의 
감소에 의해 생성된 스페이스에 있어 줄기세포가 증식 분화하는 것으로 생기는 것이어도 좋, ·
다 따라서 본 발명의 한 형태는 섬유화 조직에 축적된 콜라겐이 감소되어 생성되는 줄기세. , , 
포의 증식 분화용의 스페이스에 있어 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생하기 위한 상기 · , 
위약 조성물에 관한 것이다. 여기서 줄기세포에는 한정하지 않고 예를 들면 섬유화한 조직, , , , 
에 본래 존재하는 것 간 줄기세포 췌장 줄기세포 폐 줄기세포 신장 줄기세포 골수 줄기세( , , , , 
포 심장 줄기세포 비장 줄기세포 자궁 줄기세포 피부 줄기세포 유선 줄기세포 장관 줄기, , , , , , 
세포 간엽계 줄기세포 등 나, ) , 체내의 다른 장소로부터 이동해 온 것 또한, , 치료적으로 투여
한 것 등이 포함 된다 또한 스페이스 는 조직 내의 공극뿐만 아니라 세포가 확대 증식할 수 . , , ·「 」
있는 여지가 있는 공간 예를 들면 세포 간의 압력이 감소된 공간이나 유연성을 가지는 공, , , 
간 등을 포함한다.
- 21 -
포함하는 것으로 해석된다.
(3) 외부 독소의 해독을 담당하는 간은 수많은 독성 물질에 노출되므로 간세포의 , 
손상은 생존 기간 필연적으로 수반된다 만약 간이 다른 장기처럼 재생되지 않는다면 생. 
명 유지가 곤란해지므로 간은 인체에서 재생이 가장 잘되는 특성을 가지고 있다 간세포, . 
의 재생에 관여하는 세포 중 간 전구세포 난원세포 는 심한 간 손상으로 간세포 자체의 ( )
증식이 한계점에 도달한 경우 즉 성숙한 간세포의 탁월한 재생 능력이 더는 작동하지 않, 
는 경우에 활성화되는 세포로서 을 제 호증 본래부터 간에 상주하고 있는 간 줄기( 2, 5, 6 ), 
세포의 일종이다 그리고 선행발명은 간경변증 또는 섬유증이 모든 형태의 간 손상에서. ‘
의 궁극적인 병리학적 특징으로 기재하고 있으므로’ , 선행발명에서 치료하고자 하는 간‘
경변증 또는 섬유증도 정상적인 간세포의 재생 능력이 고갈되어 ’ 간 전구세포 활성화가 
수반된 상태를 포함하고 있다고 할 것이다.
을 제 호증2
간 내 줄기세포 1. 
간은 이미 성숙한 간세포 와 난원세포 (hepatocyte) (hepatic oval cell, hepatic progenitor cell)
라는 두 개의 대표적인 줄기세포를 내포하고 있으며 이 중 성숙한 간세포는 탁월한 재생력으, 
로 자기재개를 하여 간 재생에 중요한 역할을 하므로 과거부터 줄기세포로 정의되어 왔다 간. 
내 두 번째 줄기세포인 난원세포는 투여로 성숙한 간세포 증식2-acetylaminofluorene(2-AAF) 
을 억제하면서 간절제술 또는 사염화탄소(CCl4 로 간손상을 유도하게 되면 간내 줄기세포가 ) , 
활성화되어 간세포와 담도세포로 분화하여 간의 손실된 양을 회복시켜 손상된 간을 구하게 
된다.5,6 간내 줄기세포는 문맥역 주변의 담관과 간세포줄 경계에 존재하는 에 위 Hering canal
치하는 세포로 핵이 크고 세포질이 작아 난원세포로 불리며 심한 간 손상으로 간세포 자체 , 
증식의 한계점에 도달할 경우 간 내 줄기세포가 활성화, 된다.
을 제 호증5
초록 [ ] 
간은 고유한 재생 특성의 진화적 발달에 의해 섭취된 독소의 유입에 적응하고 성숙한 세 
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포의 급속한 분열에 의해 손상이나 조직 손실에 반응한다 간 실질 세포 즉 담관의 간세포 . , 
및 상피 세포의 증식은 수많은 사이토카인 성장 인자 매개 경로에 의해 조절되며 세포외기/ , 
질 분해 및 맥관 구조의 복원과 동시에 발생한다 또한 . 상주하는 간 줄기 전구세포는 정상 /
간에서 적은 수로 확인되었으며 간 조직 복구와 관련이 있다 그러나 간의 생리학 병태생리. , 
학 및 치료에서의 추정적 역할은 아직 정확하게 알려져 있지 않다. 설치류에서 난원세포 라“ ”
고도 알려진 간 줄기 전구세포는 간세포 및 담관 복제 능력이 소진되거나 실험적으로 억제되/
는 시점 기능성 줄기 전구세포 풀 에서 간 조직 복구와 관련( / ) 12)이 있다 간의 생리학 및 병태. 
생리학에서 줄기 전구 세포의 역할에 대해 훨씬 더 많은 것을 배워야 하지만 이러한 세포의 /
치료적 가치에 대한 실험적 분석이 시작되었다. 간 줄기 전구세포의 이식/ 13) 또는 간 줄기세
포 풀 의 생체 내 약리학적 활성화(pool) 14)는 간 질환 치료를 위한 새로운 양식을 제공할 수 
있다 또한. , 간 외 줄기세포 예 골수세포 가 간 재생에 기여( , ) 15)하는 것으로 조사되고 있다 배. 
아줄기세포에서 파생된 간 전구세포가 이 종설에 포함되어 있으며 간 질환에 대한 줄기세포 
기반 치료법의 미래 전망도 논의한다.
면 좌측 칼럼 단락 상주 간 줄기 전구세포 [272 2 ] /
상주하는 간 줄기 전구세포 구획의 존재 및 활성화 증거는 난원세포 증식의 다양 / (rHSPC) “ ” 
한 설치류 동물 모델에서 제공되었다(Alison et al. 1997; Fausto 2004; Thorgeirsson 1996). 
난원세포 활성화의 기본 원리는 간 손상과 손상 반응에 의한 간세포 증식 불능의 조합에 기
초한다 예를 들어 손상 물질을 투여한 후 부분 간 절제술을 시행하면 간세포의 분열. , DNA 
이 차단되고 그리고 난원세포가 문맥역으로부터 출현한다 이러한 , . 난원세포는 간 재생에서 
기능적 역할을 하며 즉 난원세포는 성숙한 간세포 증식이 억제되거나 또는 고갈된 경우에만 , 
조직 재생에 기여한다 및 (Fausto Campbell 2003). 
면 좌측 칼럼 단락 [273 3 ] 
상주하는 간 줄기 전구세포의 분리 배양 및 증식을 위한 프로토콜은 수십 년 동안 확립되 / , 
었다 생성된 세포주는 치료 잠재력과 간 발달 및 재생을 둘러싼 분자 현상을 탐색하는 데 . 
유용하다는 점에서 주목받았다. 난원세포주는 대부분 화학물질과 발암 물질에 노출된 설치류
의 간에서 유래되었다. 
면 우측 칼럼 단락 [273 3 ]
인간 간에서 전구세포 활성화는 다양한 간 질환과 관련이 있으며 전구세포의 수는 질병의 
- 23 -
중증도와 관련이 있다 등 이러한 설치류 모델에 대한 우리의 지식과 병행하(Roskams 2003). 
여 성숙한 간세포의 복제 억제는 인간 간 질환에서도 억제된다 최근 간세포는 텔로미어 단. 
축에 따라 다양한 만성 인간 간 질환의 간경변 단계에서 노화되는 것으로 나타났다(Marshall 
등 등 아마도 이 간세포 복제 노화는 부분적으로 만성 간 질환이 2005; Wiemann 2002). 
년 동안 계속된 증식의 결과일 것이다20-30 . 만성 염증과 성장 인자 및 반응성 산소 종 및 
질소 종과 같은 손상 인자DNA 의 존재도 중요한 역할을 한다 몇몇 만성 인간 간 질환 특. , 
히 원발성 담즙성 간경변증은 난원세포 증식을 나타낸다 등 등 (Bisgaard 2002; Tan 2002). "
전구 세포 증식이 간암종 및 담관암종의 진행과 연관되어 있다는 증거가 증가하고 있다" 
그러나 난원세포가 단순히 발암성 질병 상태의 (Alison and Lovell 2005; Petersen 2001). 표
지자인지 또는 난원세포가 변형의 특별한 위험에 처해 있는지 여부는 여전히 불분명하다.
을 제 호증6
초록 [ ]
간 전구세포는 간세포 및 담관세포 계통으로 분화할 수 있는 인간 및 동물의 간에 존재하 
는 이중 잠재성 줄기세포이다 성인 간에서 . 간 전구세포는 증식률이 낮은 휴지 줄기세포이고, 
간의 성숙한 상피세포가 지속적으로 손상되거나 복제가 억제되거나 심각한 세포 손실이 있는 
경우에만 활성화되는 예비 구획을 나타낸다. 
간 전구세포 활성화는 다양한 급성 및 만성 간질환에서 기술되었다 후략. ( )
면 우측 칼럼 간 전구세포 [455 ] 2. 
간 전구세포 또는 는 간세포 및 담관세포 계통으로 분화할 수 있는 인간 및 동물에 존 ( HPC)
재하는 이중 잠재력 줄기세포이다[2,3]. 이 구획은 전구세포 인간에서 또는 난원세포 설치류( ) (
에서 구획으로 불리며) 관에 위치한다 그림 , Hering ( 1). 
면 우측 칼럼 간 전구세포의 활성화 [456 ] 3. 
성인 간에서 간 전구세포는 증식률이 낮은 휴지 줄기세포이다 그림 간 손상에 반응하더 ( 3). 
라도 세포 손실과 중량은 일반적으로 간세포와 담관세포의 복제를 통해 회복된다 왜냐하면 . 
부분 간 절제술이나 담관 결찰과 같은 여러 실험 모델에서 입증된 것처럼 이들은 거의 무한
한 자기 재생능력을 갖고 있기 때문이다 이러한 조건에서 소엽간 담관의 간세포 또는 담관. 
세포는 높은 증식률을 보이며 각각 간의 복구 또는 담관 중량의 증가를 책임진다 따라서 . 간 
전구세포는 간의 성숙한 상피세포가 지속적으로 손상되거나 복제가 억제되거나 심각한 세포 
손실이 있는 경우에만 활성화된다 이러한 조건에서 상주하는 간 전구세포는 활성화되고 문. 
- 24 -
(4) 따라서 선행발명이 줄기세포의 증식 분화에 의한 재생을 직접적으로 언급하․
지 않을지라도 병리학적 특성상 간경변증은 적어도 간 전구세포와 같은 줄기세포가 활성, ‘ ’
화되어 세포의 증식 분화가 수반되고 있는 상태로 보는 것이 합리적이고 달리 구성요소 , ․
에서 줄기세포의 증식 분화에 의한 정상 조직의 재생이 이식된 줄기세포가 증식 분화3 ‘ ’ ‘․ ․
되는 것에 의한 정상 조직의 재생인 것으로 제한 해석하여야 할 이유가 없다’ .
5) 효과의 대비
이 사건 출원발명에는 섬유화 조직에 축적된 콜라겐의 감소에 의해 생성된 공간
에 표지된 줄기세포가 이식된 위치에서 증식 분화하여 정상 조직을 재생하는 것GFP ․
과 줄기세포의 분화에 물리적 공간 및 활성화 성상세포의 작용이 중요하다는 것을 확, 
12) 이 사건 출원발명의 명세서의 식별번호 에 기재된 가지 줄기세포 중 첫 번째 유형에 대응된다 [0051] 3 .
13) 이 사건 출원발명의 명세서의 식별번호 에 기재된 가지 줄기세포 중 세 번째 유형에 대응된다 [0051] 3 .
14) 이 사건 출원발명의 명세서의 식별번호 에 기재된 가지 줄기세포 중 첫 번째 유형에 대응된다 [0051] 3 .
15) 이 사건 출원발명의 명세서의 식별번호 에 기재된 가지 줄기세포 중 두 번째 유형에 대응된다 [0051] 3 .
맥주위 영역으로부터 중심주위 영역의 간세포 및 또는 담관 세포로 확장된다/ [9, 13-15]. 
면 좌측 칼럼 단락 [458 4 ]
간세포의 급성 대량 괴사 후 간 재생에는 전구 구획의 눈에 띄는 증식이 존재한다 유사하 . 
게, 현저한 간 전구세포 활성화는 대부분의 만성 간 질환에서도 기술되었다[2, 17, 18].
면 좌측 칼럼 단락 [458 6 ] 
전략 간세포 복제의 억제는 장기간의 만성 간 질환에서도 발생하며 간 전구세포 활성화 ( ) 
와 관련이 있다 여러 . 만성 간 병리학에서 간 전구세포의 증식 정도는 섬유증 정도와 상관관
계가 있다[19].
면 우측 칼럼 단락 [458 1 ]
간 전구세포 활성화가 일어나지 않는 인간 간 질환은 소수에 불과하다 중략 대조적으로. ( ) , 
이 질병의 임상적 및 병리학적 진행 동안 그 역할에 관한 정보가 적음에도 불구하고 원발성 
담즙성 간경변증 과 같은 마성 담즙성 질환에서 두드러진 간 전구세포의 관여가 기술되(PBC)
었다[20]. 
- 25 -
인한 효과가 기재되어 있는 반면 선행발명에는 위와 같은 내용이 구체적으로 기재되, 
어 있지는 않다 그러나 다음과 같은 이유로 이식된 줄기세포의 증식 분화와 관련된 . ․
공간의 중요성 및 활성화 성상세포의 간 내 줄기세포의 활성화 역할을 확인한 것은 통
상의 기술자가 선행발명으로부터 예측할 수 있는 효과의 범주 내에 있다고 보는 것이 
타당하다.
가) 심한 간 손상으로 간세포 자체 증식이 한계점에 도달할 경우에 간에 본래부터 
존재하는 줄기세포의 일종인 난원세포 간 전구세포 가 ( ) 활성화된다는 것은 이 사건 출원
발명이 속한 기술분야에 주지된 사실이다 을 제 호증 간이 손상되면 성상 세포가 ( 2, 5, 6 ). 
활성화되어 콜라겐을 생성하여 섬유화를 유발하는 병리 기전을 고려하면 심한 간 손상, 
일 때에도 성상 세포는 활성화된 상태일 것은 자명하고 그에 따라 휴지기의 난원세포가 , 
활성화되는 것으로 미루어 짐작할 수 있다 이와 같은 간 손상 과정에서 성상 세포와 난. 
원세포의 상호작용은 통상의 기술자가 예측할 수 있는 범주 내에 있고 성상 세포에 의한 , 
난원세포 활성화는 생체 내에서 순차적으로 진행되는 일련의 생리 기능에 해당하므로 이
를 규명한 것이 새로운 의약용도를 제공하는 정도라 할 수도 없다. 
나) 생물학 분야에서 세포의 증식 분화 시 접촉 억제 기전이 (contact inhibition) ․
작용하므로 세포 등을 배양할 때에는 컨플루언스 상태, (confluence) 16)에 도달하기 전에 
다른 배양 시스템으로 분주하는 것이 기술 상식이다 줄기세포를 저밀도 조건 즉 콜라겐. ( , 
의 감소로 물리적 공간에 여유가 생긴 상태 에서 배양한 경우 고밀도 조건인 컨플루언스 )
상태에서 배양한 것보다 더 잘 증식 분화된 것을 확인한 정도는 통상의 기술자가 쉽게 ․
예측할 수 있는 효과이다. 
16) 세포배양 시 세포의 자란 상태가 일정 기간 공간 내에서 가득 찬 상태를 말한다 .
- 26 -
다) 또한 앞서 살핀 바와 같이 이 사건 제 항 발명의 줄기세포가 이식된 줄기세, 1 ‘ ’ ‘
포만을 의미하는 것도 아니고 이 사건 출원발명은 이식 줄기세포를 로 표지하여 추’ , GFP
적 관찰한 결과 표지된 줄기세포 대부분이 알부민을 발현하고 있어서 이식된 줄기GFP 
세포가 간 실질세포로 분화된 것을 확인하고 있기는 하나 도 간에 본래 존재하던 줄( 7), 
기세포에 의해서도 축소된 섬유화 영역에서 간은 재생될 수 있다 이 사건 출원발명의 도 . 
을 보면 이식 부위 이외에는 이식된 줄기세포가 존재하지 않음에도 해당 영역에서 간10 , , 
세포 실질 마커인 알부민이 검출되고 있는 것이 확인되고 이 때 알부민은 이식된 줄기세, 
포가 없던 영역에도 간 실질세포가 존재한다는 것을 의미한다 이는 간에 본래 존재하던 . 
난원세포 간 전구세포 와 같은 줄기세포가 축소된 섬유화 영역에서 간 실질세포로 재생( )
되어 검출된 것으로 볼 수 있다 나아가 이는 본래 간에 상주하던 간 전구세포가 중증 간 . 
섬유증에 의해 활성화된 상태에서 간 섬유증의 진행이 투여에 의해 , VA-lip-siRNAgp46 
반전되어 섬유화가 축소될 경우 축소된 영역은 당연히 간조직의 유연성이 증가된 상태, 
가 되고 해당 위치에서 활성화된 난원세포와 같은 줄기세포에 의해 간이 재생되는 것을 , 
실험적으로 확인한 것이라 할 수 있다. 
도 7 도 10
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라) 더욱이 선행발명은 투여에 의해 간 섬유화 영역이 축소되고 VA-lip-siRNAgp46 
거의 완전히 정상적인 간 구조로 복원되므로 이 간 섬유증을 회복할 VA-lip-siRNAgp46
수 있다고 기재하고 있다 선행발명의 명칭 그런데 회복( ). (resolution)17)이라는 문언의 보
편적인 의미에 비추어 볼 때 선행발명에 있어 회복이란 간 섬유화 영역이 , ‘ ’
투여에 의해 축소된 후 그 영역이 비어있는 상태로 유지되는 것이 아VA-lip-siRNAgp46 
니라 정상적인 간 구조의 형태가 갖추어진 상태인 정상 상태로 되돌아온 것을 의미하는 , 
것으로 보아야 한다 따라서 선행발명에 직접적으로 섬유화 축소 영역에서 줄기세포가 . 
증식 분화된 것이 기재되어 있지 않을지라도 이 사건 출원발명은 선행발명에서 암시된 , ․
효과를 단순히 확인하여 기재한 것에 불과하다. 
6) 검토결과의 정리
이 사건 제 항 발명은 통상의 기술자가 선행발명으로부터 쉽게 발명할 수 있으므 1
로 진보성이 부정된다.
나. 소결론
특허출원에서 청구범위가 둘 이상의 청구항으로 이루어진 경우에 어느 하나의 청구 
항이라도 거절이유가 있는 때에는 그 특허출원 전부가 거절되어야 한다 대법원 ( 2009. 
선고 후 판결 참조 이 사건 제 항 발명이 그 진보성이 부정되어 특12. 10. 2007 3820 ). 1
허를 받을 수 없는 이상 나머지 청구항에 관하여 더 나아가 살펴볼 필요 없이 이 사건 
출원발명은 특허를 받을 수 없다 이와 결론이 같은 이 사건 심결은 적법하다. .
4. 결론 
이 사건 심결의 취소를 구하는 원고의 청구는 이유 없어 기각한다 . 
17) 회복하다 병적 과정에서 정상 상태로 돌아오는 것제 판 의학대사전 년 월 일 발행 편저자 이우주 발행 resolve( ) : ( 2 , 1999 1 20 , , 
처 도서출판 아카데미서적)
- 28 -
재판장 판사 이형근
판사 임경옥
판사 윤재필
- 29 -
별지 1 
이 사건 출원발명의 주요 내용 및 도면
기술분야 
[0001] 본 발명은 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생하기 위한 조성물 및 방법에 관한 
것이다.
배경기술 
[0003] 조직의 섬유화는 콜라겐을 중심으로 하는 세포 외 매트릭스가 조직에 과도하게 생
산 축적되는 것으로 생긴다 조직은 산화 스트레스 저산소 상태 염증 세포사멸· . , , , (apoptosis)
등의 자극에 의해 손상을 받았을 경우 손상 조직을 세포 외 매트릭스로 대체하여 회복을 , 
도모하지만 손상이 중증의 경우나 해당 자극이 만성화됐을 경우 등에는 세포 외 매트릭스, 
의 축적이 과도하게 되어 조직이 그 기능을 충분히 완수할 수 없게 된다 섬유화는 간 췌. , 
장 폐 신장 골수 심장 등의 각종 장기에서 보여지며 근섬유모세포, , , , (myofibroblastic cell) 
등의 콜라겐 생산 세포가 병태 에 관여하고 있다고 생각되고 있다 종래 섬유화는 불가( ) . 病態
역적인 현상이며 일단 섬유화한 조직이 원래대로 돌아갈 수 없다고 생각되어 왔지만 최근, , 
에는 섬유화가 가역적인 것이며 상기 설명과 같은 섬유화 자극이 소실하면 조직에 축적한 , 
세포 외 매트릭스가 감소하는 것을 시사하는 몇 개의 보고가 있다 비특허문헌 내지 ( 1 318) 
참조). 
[0004] 그렇지만 병적인 세포 외 매트릭스의 축적이 감소한 후의 조직에서 구체적으로 무, 
엇이 발생하는 지에 대한 상세한 보고는 없고 해당 섬유화 조직으로 정상 조직의 재생이 , 
일어나는 것도 정상 조직의 재생을 일으킬 수 있는 것도 지금까지 전혀 알려지지 않았다, . 
[0005] 또한 조직의 섬유화에는 바이러스 감염 음주 약물 등에 유래하는 섬유증 등 병인, , , 
이 명확하고 그 제거가 가능한 것뿐만이 아니라 직접적인 병인이 불명한 섬유증 예를 들면 , , , 
특발성 간경변 특발성 폐 섬유증 특발성 골수 섬유증 등 또는 직접적인 병인은 알고 있지, , , , 
만 그 병인의 원인이 불명한 것이나 제거 곤란한 것 예를 들면 방사성 발전성 담즙성 간, , , , 
경변 비알코올성 지방간염 유래의 간 섬유증 원발성 경화성 담관염 등도 포함된다, (NASH) , . 
이러한 병인의 제거가 곤란한 섬유화가 존재하는 조직은 끊임없이 섬유화 자극에 노출되어 
있는 상태에 있지만 해당 섬유화 조직에 대해 병적인 세포 외 매트릭스의 축적을 감소시킬 , 
- 30 -
수 있는 것도 더욱이 조직을 재생할 수 있는 것도 지금까지 전혀 알려지지 않았었다, .
발명의 내용
해결하고자 하는 과제[ ]
[0007] 본 발명은 섬유화가 존재하는 조직에 대해 치료적으로 정상 조직을 재생하기 위한 
조성물 및 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
과제의 해결 수단[ ]
[0009] 본 발명자들은 상기 과제를 해결할 수 있도록 열심히 연구를 계속하는 가운데, 섬유
화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 조직에서도 조직에 축적한 콜라겐을 감소시킬 수 있는 
것과 또한 조직에 축적한 콜라겐을 제거하여 줄기세포가 증식 분화할 수 있는 공간을 확보, , ·
하는 것으로 섬유화 조직으로부터 정상적인 조직을 재생할 수 있는 것을 확인함으로써 본 , 
발명을 완성시켰다.
[0010] 상기와 같이, 섬유화 자극이 소실하면 조직에 축적한 세포 외 매트릭스가 감소할 수 
있는 것은 알려져 있었지만 섬유화 자극을 계속 받고 있는 섬유화 조직에 대해 조직에 축, 
적한 콜라겐을 감소시킬 수 있는 것도 조직에 축적한 콜라겐을 적극적으로 제거하는 것으, 
로 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생할 수 있는 것도 지금까지 완전히 알려져 있지 , 
않았고 이것은 놀라운 결과이다, . 
발명의 효과[ ]
[0023] 본 발명에 의해 지금까지 정상 조직의 재생이 일어나지 않는다고 생각되고 있던 섬
유화 조직으로부터 정상 조직을 재생할 수 있는 것을 확인하였다 이것에 의해 섬유화 조직. 
으로부터 정상 조직을 치료적으로 재생할 수 있게 되어 섬유화 질환의 새로운 재생 치료가 
가능해진다.
[0024] 또한 본 발명에 의해 섬유화 자극에 계속적으로 노출되어 있는 섬유화 조직의 치료, 
가 가능해지며 종래 유효한 치료법이 존재하지 않았던 섬유화 질환이나 장기 이식밖에 치, 
료법이 없었던 섬유화 질환을 포함한 모든 섬유화 질환의 내과적 치료가 실현되기 때문에 
의료 및 수의학에 대한 지대한 공헌을 기대할 수 있다. 
발명을 실시하기 위한 구체적인 내용 
[0027] 본 발명은 콜라겐 감소 물질을 포함하는 섬유화 조직으로 부터 정상 조직(collagen) 
을 재생하기 위한 조성물에 관한 것이다. 
- 31 -
[0029] 본 발명에 있어서 콜라겐 생산 세포는 섬유화 조직에 있어서 콜라겐을 생산하는 임
의의 세포를 의미하며 한정되지 않고 예를 들면 활성화별세포 근섬유모세포, , , , 
등을 포함한다 활성화별세포 및 근섬유모세포 는 (myofibroblastic cell) . (myofibroblastic cell)
섬유화 조직에서 주요한 콜라겐 생산원이라고 생각되고 있고 있어 평활근 엑틴-SMA( -α α
의 발현을 특징으로 하고 있다 따라서 본 발명에서 활성화별(alpha smooth muscle Actin)) . , 
세포 및 근섬유모세포 는 검출 가능하게 표지된 항 항체를 이용(myofibroblastic cell) -SMA α
한 면역 염색 등에 의해서 동정 되는 것이다( ) .同定
[0030] 콜라겐 생산 세포에 의한 콜라겐 생산을 억제하는 물질은 섬유화 조직에서 콜라겐 
축적에 관계하는 동일 세포의 물리적 화학적 및 또는 생리적인 작용 등을 직접 또는 간접, /
에 억제하는 임의의 약물을 포함하며 한정되지 않고 예를 들면, , , TGF- (Transforming β
저해 물질 또는 이의 생산 촉진 물질growth factor-beta) , HGF(Hepatocyte growth factor) , 
리간드 안지오텐신PPAR- (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma) , γ
저해 물질 저해 물질 릴렉신(Angiotensin) , PDGF(Platelet-derived growth factor) , (Relaxin) 
또는 이의 생산 촉진 물질 세포 외 매트릭스 성분의 생산 분비를 저해하는 물질 세포 활성 , · , 
억제 물질 세포 증식 억제 물질 세포사멸 유도 물질 등을 포함한다, , (apoptosis) .
[0036] 세포 외 매트릭스 성분의 생산 분비를 저해하는 물질은 한정하지 않고 예를 들면· , , 
콜라겐 중략 등의 세포 외 매트릭스 성분의 발현을 억제하는(Collagen), ( ) , 분자 리보RNAi , 
자임 안티센스 핵산 등의 물질, 혹은 도미넌트 네가티브 변이체 등의 , (Dominant negative) 
도미넌트 네가티브 효과를 가지는 물질 이들을 발현하는 벡터 및 이들로 형질 전환된 세, , 
포 등을 들 수 있다. 콜라겐의 생산 분비를 저해하는 약물은 한정되지 않고 예를 들면 여· , , , 
러 가지 타입의 콜라겐의 합성 과정에서 공통되는 세포 내 수송 및 분자 성숙화에 필수인 
콜라겐 특이적 분자 샤페론 인 의 저해물질 예를 들(chaperone) HSP(Heat shock protein) 47 , 
면 에 대한 분자, HSP47 RNAi , 리보자임 안티센스 핵산 등의 발현 저해 물질 혹은 , HSP47 , 
의 도미넌트 HSP47 네가티브 변이체 등의 도미넌트 네가티브 효과를 가지는 물질 이들을 발, 
현하는 벡터 및 이들로 형질 전환된 세포 등을 들 수 있다, .
[0042] 본 발명에서 분자RNAi 에는 siRNA(small interfering RNA) 중략 포함된다 또한 본 , ( ) . , 
발명에서 핵산은 또는 이들의 복합물을 포함한다RNA, DNA, PNA, .
본 발명의 한 형태에 있어서 [0049] 섬유화 조직은 섬유화 자극을 계속적으로 받고 있는 것
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이다 본 발명에 대해 섬유화 자극은 섬유화를 유도하는 임의의 자극을 의미하여 한정하지 . , 
않으며 예를 들면 산화 스트레스 저산소 상태 염증 세포사멸 등을 포함, , , , , (apoptosis) 한다
참조 해당 조직(Ghiassi-Nejad et al., Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 2008;2(6):803-16 ). 
으로는 예를 들면, , 만성 염증을 일으키고 있는 섬유화 조직이나 , 세포 장해성 물질에 끊임
없이 노출되어 있는 조직 예를 들면 담관 질환등에 의해 담즙의 울체가 일어나고 있는 간 ( , 
조직 등을 들 수 있다 또한 해당 조직에는 직접적인 병인이 불명한 섬유증 예를 들면 특) . , , , 
발성 간경변 특발성 폐 섬유증 특발성 골수 섬유증 등 또는 직접적인 병인은 알고 있지, , , , 
만 그 병인의 원인이 불명한 것이나 제거 곤란한 것 예를 들면 원발성 담즙성 간경변 비, , , , , 
알코올성 지방간염 유래의 간 섬유증 원발성 경화성 (non-alcoholic steatohepatitis;NASH) , 
담관염 특발성 폐 섬유증 특발성 간질성 폐렴 유래의 폐 섬유증 원발성 골수 섬유증 특발, , , , 
성 간질성 신장염 유래의 신장 섬유증 염증성 장질환 예를 들면 만성 크론병 궤양성 대장, ( , 
염 등 전신성 강피증 등으로 이환한 조직 등도 포함된다), .
[0050] 본 발명에 있어 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생한다「 」는 섬유화에 의해서 
변질한 조직을 적어도 섬유화가 보다 경도인 상태로 회복시키는 것을 의미, 한다 즉 섬유화. , 
가 진행되는 것에 따라 조직은 세포 외 매트릭스를 중심으로 한 섬유 조직으로 치환되어 가, 
지만 이 흐름을 역전시켜 증식한 섬유 조직을 본래의 정상 조직으로 치환해 가는 것이 본 , , 
발명에서 섬유화 조직으로부터의 정상 조직의 재생이다 따라서 본 발명에서 섬유화 조직으. , 
로부터의 정상 조직의 재생은 섬유화 조직을 완전하게 원 상태로 회복시키는 것뿐만 아니라, 
섬유화 조직을 부분적으로 원래 상태에 회복시키는 것도 포함한다 정상 조직의 재생 정도. 
는 생검 시료 등의 조직학적 검사에 의해 조직 구조의 정상화 섬유 조직이 차지하는 영역, , , 
의 축소 정상 조직이 차지하는 영역의 확대 등에 기초를 두어 평가해도 좋고 본 발명의 조, , 
성물에 의한 처리 전에 섬유화에 기인하는 생화학적 지표의 이상이 인정되고 있는 경우에는, 
해당 지표의 개선 등에 의해서 평가해도 좋다.
[0051] 본 발명의 한 형태에 있어서 정상 조직의 재생은 섬유화 조직에 축적된 콜라겐의 감
소에 의해 생성된 스페이스에 있어 줄기세포가 증식 분화하는 것으로 생기는 것이어도 좋, ·
다 따라서 본 발명의 한 형태는 섬유화 조직에 축적된 콜라겐이 감소되어 생성되는 줄기. , , 
세포의 증식 분화용의 스페이스에 있어 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생하기 위한 · , 
상기 의약 조성물에 관한 것이다. 여기서 줄기세포에는 한정하지 않고 예를 들면 섬유화, , , , 
- 33 -
한 조직에 본래 존재하는 것 간 줄기세포 췌장 줄기세포 폐 줄기세포 신장 줄기세포 골수 ( , , , , 
줄기세포 심장 줄기세포 비장 줄기세포 자궁 줄기세포 피부 줄기세포 유선 줄기세포 장, , , , , , 
관 줄기세포 간엽계 줄기세포 등 나 체내의 다른 장소로부터 이동해 온 것 또한 치료적으, ) , , , 
로 투여한 것 등이 포함된다 또한 스페이스 는 조직 내의 공극뿐만 아니라 세포가 확대. , , ·「 」
증식 할 수 있는 여지가 있는 공간 예를 들면 세포 간의 압력이 감소된 공간이나 유연성, , , 
을 가지는 공간 등을 포함한다.
[0052] 본 발명의 조성물은 그 한 형태에 있어서 섬유화 조직에서 콜라겐 생산 세포에 대, , 
한 표적화제를 한층 더 포함한다 표적화제를 포함하는 것으로 콜라겐 생산 세포를 표적으. , 
로 하는 콜라겐 감소 물질 중략 등을 표적 세포인 콜라겐 생산 세포에 특이적으로 전달, ( ) , 
하는 것이 가능해져 사용하는 콜라겐 감소 물질의 효과를 높일 수 있다, .
[0053] 본 발명의 한 형태에 있어서, 콜라겐 생산 세포에 대한 표적화제는 레티노이드이다. 
레티노이드에 의한 표적화 기구는 아직 완전하게 해명되어 있지 않지만 예를 들면, , 
와 특이적으로 결합한 레티노이드가 섬유화 조직에서 콜라겐 RBP(Retinol binding protein) , 
생산 세포의 세포 표면상에 위치하는 어떤 종류의 리셉터를 통하여 상기 세포에 편입되는 
것을 생각할 수 있다 레티노이드가 콜라겐 생산 세포의 표적화제로서 기능 할 수 있는 것. 
은 특개 특개 등에 기재되어 있다, WO 2006/068232, 2009-221164, 2010-59124 .
[0075] 전략( ) 또한 정상 조직의 재생은 조직학적 소견이나 표지한 줄기세포를 섬유화 조직, , , 
에 투여하여 이것을 추적 조사하는 것 등에 의해 평가할 수 있다.
[0076] 전략 섬유화의 모델 동물로는 사염화탄소 돼지 혈청 디메틸니트로사민( ) , (CCl4), , 
메티오닌 코린 결핍식(dimethylnitrosamine; DMN), - (methionin-and choline- deficient(MCD) 
콘카나바린 담관 결찰 등에 의한 간경변 모델 블diet; MCDD), A(concanavalin A; Con A), , 　
레오마이신 등에 의한 폐 섬유증 모델 이 염화 디부틸 주석(bleomycin; BLM) , (dibutyltin 
등에 의한 췌장 섬유증모델 트롬보포이에틴 트랜(DBT) dichloride) , (Thrombopoietin; TPO) 
스제닉 마우스 등의 골수 섬유증 모델 등(transgenic) (Leukemia Research 29: 761-769, 2005)
의 여러 가지를 이용할 수 있다. 
[0080] 본 발명의 방법에 있어서 용어 대상 은 임의의 생물 개체를 의미하며 바람직하게, 「 」
는 동물 더 바람직하게는 포유동물 더욱 바람직하게는 사람이다 본 발명에 있어서 대상은 , , . 
건강하거나 어떠한 질환에 이환되어 좋지만, 전형적으로는 섬유화 조직을 가지거나 조직이 
- 34 -
섬유화하는 리스크 를 가지는 대상을 의미한다 해당 대상으로서 예를 들면 한정하지 (risk) . , 
않고 상기의 장기 섬유증에 이환되어 있거나 이환한 리스크를 가지는 대상 조직이 섬유화 , , 
자극을 받고 있거나 받는 리스크가 있는 대상 등을 들 수 있다 .
[0081] 더욱이 본 발명은 , 섬유화 조직에서 콜라겐을 감소하는 단계 및 또는 섬유화 조직에 /
대해 세포 증식 분화용의 스페이스를 생성하는 단계· 를 포함하는 섬유화 조직으로부터 정상 
조직을 재생하기 위한 방법에 관한 것이다.
[0083] 본 방법에 있어서 섬유화 조직에서 콜라겐의 감소 및 세포 증식 분화용의 스페이스·
의 생성은 본 발명의 조성물 또는 상기에서 서술한 콜라겐 감소 물질을 섬유화 조직에 투
여하는 것으로 실시할 수 있다.
실시예 의 제조[0088] < 1> VA-lip siRNA　
[0089] 의 제조(1) siRNA
[0090] 콜라겐 형 의 공통 분자 샤페론인 사람 (I~IV ) 의 래트 호모 로그HSP47 , gp46(GenBank 
Accession No. M69246)의 염기 배열을 표적으로 하는 siRNA 홋카이도 시스템 사이언스( · , 
의 센스 사슬 및 안티센스 사슬은 이하의 것을 이용했다Sapporo, Japan) .
[0098] 의 제조(2) VA-lip siRNA　
[0099] 양이온성 지질로서 디테트라데카노일 트리메틸암모니오아세틸 디에탄올아O,O'- -N-(- ) 
민클로라이드(ditetradecanoyl-N-(trimethylammonioacethyl)diethanolaminechloride)(DC-6-
콜레스테롤 및 디올레오일 글14), (cholesterol) 1,2- -sn- 리세로 포스포에탄올라민-3- (1,2-Diole-
oyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine) 을 의 몰비로 포함하는 양이온성 (DOPE) 4 3 3： ：
리포솜 을 홋카이도 시스템 사이언스 일본 으로부터 구입했다 리포솜은(LipoTrust) · (Sapporo, ) . , 
사용 전에 동결건조 한 지질 혼합물에 교반 조건하에서 재증류수 를 첨가하는 것에 , (DDW)
의해서 의 농도로 제조했다, 1 mM(DC-6-14) . 결합 리포솜을 조제VA 하기 위해서 에 , DMSO
용해한 의 200 nmol 비타민 레티놀 를 리포솜 현탁액 로 A( , Sigma, USA) (DC-6-14 100 nmol)
과 튜브에서 교반하면서 로 혼합1.5 25㎖ ℃ 했다 를 담지하는 결합 리포솜. siRNAgp46 VA
(VA-lip-siRNAgp46 을 조제하기 위해 때문에) ( ), 용액 중에 을 레siRNAgp46 (DDW 580 pmol/ )㎖
티놀 결합 리포솜 용액에 교반하면서 실온하에서 첨가했다 와 와의 몰비는 . siRNA DC-6-14
이었다 에서의 사용에 바람직한 용량을 얻기 위해서 를 인산완충 1 11 . in vitro VA-lip siRNA： 　
생리 식염수 로 재구성했다(PBS) .
- 35 -
[0101] 실시예 간섬유화 모델 래트로 재생 치료 실험< 2> 
[0102] 간섬유화 모델 래트의 제작(1) 
[0103] 간섬유화 모델 래트는 수컷 래트 체중 일본 에 SD ( 150~200 g)(Slc Japan, Shizuoka, )
대해서 담관 결찰을 수행하여 제작하고 결찰 후 일째의 개체28 를 본 실험에 제공했다 본 . 
모델 래트에 있어서 담관 결찰에 의해 담즙의 울체가 생겨 간조직이 섬유화 자극에 계속적, 
으로 노출된 상태가 된다.
[0105] 표지 래트 간 줄기세포의 제조(2) GFP 
[0106] 표지 래트 간 줄기세포는 주령의 유전자 도입 래트 의 간에서 GFP 4 GFP (Slc Japan)
채취했다 중략 세포수를 센 후 결합 마우스 항 항체 래빗 폴. ( ) , FITC CD45 (BD Pharmingen), -
리클로날 항 항체 및 마우스 모노클로날 항(rabbit-polyclonal) CD133 (Abcam) (monoclonal) 
항체 를 이용해 을 를 실시해 양성 양성EpCAM (Santa Cruz) MACS(R)( ) , CD133 , EpCAM , 
음성 세포를 채취하여 래트 간 줄기세포로서 본 실험에 이용했다CD45 , .
[0108] 간섬유화 모델 래트의 처리(3) 
[0109] 상기 로 제작한 간섬유화 모델 래트에게 상기 로 제조한 표지 간 줄기세포(1) , (2) GFP 
를 의 배지 속에 , 200 DME/F12 2×10㎕ 6개의 농도로 국소 이식했다.
[0110] 간 줄기세포의 이식 후 시간째부터 24 , 비타민 결합 리포솜 내포 A siRNAgp46(VA-lip　
또는 으로서 를 일 간격siRNAgp46) mock VA-lip siRNA scramble 1　 19)으로 합계 회 미정, 12
맥 투여했다 투여한 의 농도는 래트 체중에 대해서 로 사용했다 비타민 . siRNA , 0.75 mg/kg . 
및 리포솜 홋카이도 시스템 사이언스 일본 및 의 몰비는 A (LipoTrust, · , Sapporo, ) siRNA 11.
으로 했다5 11.5 1 .： ：
[0113] 상기 으로 번째의 투여가 종료한 시간 후 즉 담관 결찰 후 (3) 12 VA-lip siRNAgp46 24 (
일째 에 발현 간 줄기세포를 이식한 담관 결찰 래트의 간을 채취했다 후략52 ) , GFP . ( )
[0116] 도 은 피험 래트로부터 채취한 간의 외관과 그 그1 20) 대표적 절편의 아잔 염색상을 
나타낸다 를 투여한 군에서는 간은 위축하고 표면이 불규칙하며. VA-lip siRNA scramble , , , 
조직 중에 아잔 염색상에 있어서 청색으로 염색된 세포외 매트릭스의 축적이 광범위하게 
보여지고 소엽 구조도 흐트러지고 있었다 이것에 대해 를 투여한 군에 , . , VA-lip siRNAgp46
대해서는 외관적인 위축이 인정되지 않고 표면은 매끈하고 조직 중에 세포 외 매트릭스의 , , , 
축적은 거의 보이지 않고 투여군에 비해 , VA-lip siRNA scramble 섬유화 영역의 축소가 보
- 36 -
였다 또한 중심 정맥으로부터 방사상으로 유동. , (sinusolid21) 이 주행하는 정상적인 소엽 구)
조가 회복하고 있는 것이 명확하게 보였다. 
[0117] 도 는 항체의 염색상이다 청색의 부분은 헤마토실린 으로 2 -SMA DAB . (hematoxylin)α
염색된 핵을 나타내고 진한 갈색 부분이 양성 영역이다 는 활성화 별세포의 -SMA . -SMAα α
마커로서 알려져 있어 양성 영역에는 활성화 별세포가 존재한다고 생각된다-SMA . VA-lip α
투여군에 있어서 과 비교해 현저한 활성화 별세포의 감siRNAgp46 , VA-lip siRNA scramble
소를 보였다.
도 1 도 2
[0118] 도 은 표지 간 줄기세포 이식 부위에 있어서 및 의 형광상이다3 GFP DAPI GFP . 
투여군에 있어서 약 의 영역에서 의 발색을 보였던 것에 비해VA-lip siRNAgp46 80% GFP , 
투여군에 있어서 거의 관찰되지 않았다VA-lip siRNA scramble .
[0119] 도 는 표지 간 줄기세포 이식 부위의 명시야상과 형광상이다4 GFP GFP . VA-lip 
투여군에서는 특히 혈관 주위 등에 있어 세포 외 매트릭스의 침착을 위해siRNA scramble 
서 세포의 형상이 희미해져 유동 도 불규칙하게 주행하고 있는 것에 반해(sinusolid) , VA-lip 
투여군에서는 뚜렷한 세포 형상과 중심 정맥으로부터 방사상으로 주행하는 유siRNAgp46 , 
동구조가 보였다 또한 투여군에서는 의 발색을 볼 수 없었는데. , VA-lip siRNAscramble GFP , 
투여군에서는 조직 전체에 걸쳐 의 발색을 볼 수 있었다VA-lip siRNAgp46 , GFP .
[0120] 도 는 투여군에서 의 형광상과 항체에 의한 형5 VA-lip siRNAgp46 DAPI, GFP GFAP 
광 염색상을 비교한 것이다 도 는 배율 배 도 는 배율 배 는 휴지 상태( 5A 200 , 5B 400 ). GFAP
의 간성세포22)의 마커로서 알려져 있는 단백질이다 를 발현하고 있는 세포는 를 . GFAP , GFP
- 37 -
발현하지 않았다.
도 5A 도 5B
[0121] 도 은 투여군에서 의 형광상과 항체에 의한 6 VA-lip siRNAgp46 DAPI, GFP -SMA α
형광 염색상을 배율 배로 비교한 것이다 를 발현하고 있는 세포는 를 발현200 . -SMA , GFPα
하지 않았다 도 및 의 결과는 간성 세포가 간 줄기세포에 유래하는 것은 아닌 것을 시. 5 6
사하는 것이다.
[0122] 도 은 투여군에서 의 형광상과 알부민 항체에 의한 형7 VA-lip siRNAgp46 DAPI, GFP
광 염색상을 배율 배로 비교한 것이다 알부민은 간실질 세포의 마커이지만 를 발현200 . , GFP
하고 있는 세포의 대부분이 알부민을 발현하고 있었다.
[0123] 도 은 투여군에서 의 형광상과 항체에 의한 형8 VA-lip siRNAgp46 DAPI, GFP DK19 
광 염색상을 배율 배로 비교한 것이다 는 담관 상피 세포의 마커이지만 담관을 200 . CK19 , 
구성하는 양성 세포는 를 발현하고 있었다CK19 , GFP . 
[0124] 도 는 투여군에서 의 형광상과 항체에 의한 형9 VA-lip siRNAgp46 DAPI, GFP CK19 
광 염색상을 배율 배로 비교한 것이다 도 는 배율 배 도 는 배율 배200 ( 9A 200 , 9B 400 ). 
는 혈관 상피 마커로서 알려져 있어 를 발현하고 있는 세포의 일부에 있어ve-CAD GFP , 
를 발현하는 세포가 관찰되었다ve-CAD .
[0125] 도 은 투여군의 세포 이식하지 않았던 부위에서 의 10 VA-lip siRNAgp46 DAPI, GFP
형광상과 알부민 항체에 의한 형광 염색상을 배율 배로 비교한 것이다 세포 이식하지 200 . 
않았던 부위에 있어서는 발현 세포는 관찰되지 않았다, GFP .
- 38 -
도 7 도 8
도 9B 도 10
[0127] 고찰
[0128] 를 발현하는 세포는 이식한 간 줄기세포 유래의 세포이므로GFP , VAlip siRNAgp46　
의 투여에 의해 세포 이식 부위에 있어서 섬유화 영역의 축소와 함께 간 줄기세포가 간실, , 
질 세포 담관 상피 세포 및 혈관 상피 세포로 분화하는 것으로써 정상적인 간 조직이 재, , 
생되는 것이 나타났다 즉 투여에 의한 치료는. , VA-lip-siRNAgp46 , 간섬유증의 치유뿐만 아
니라 간재생도 유발하는 것이 분명해졌다, 또한 투여군에서 간 줄기. , VA-lip-siRNAscramble 
세포를 검출할 수 없었던 것 도 은( 3) , 에 의한 섬유화 영역의 축소가 간 VA-lip-siRNAgp46
줄기세포의 증식 및 분화에 깊게 관여하고 있는 것을 시사하고 있다.
[0150] 도 는 억제 효과의 농도에 의한 차이를 나타내는 웨스턴 블로팅의 결과를 나타13A
- 39 -
낸다. 처리된 세포에서는 의 농도 의존적으로 의 VA-lip-siRNAgp46 VA-lip-siRNAgp46 gp46
발현 억제가 관찰되어 에 있어서는 거의 완전하게 발현이 억제된 것에 비하여50 nM , 
및 에서는 발현 억제는 관찰되지 않았다VA-lip siRNA random Lip siRNAgp46 .　 　
[0152] 도 는 미처리 세포 및 및 각각으로 처14 , VA-lip siRNAgp46 VA-lip siRNArandom 　 　
리한 세포의 시간 후의 콜라겐 생산량을 정량한 그래프이다 으로, 72 . VA-lip siRNAgp46　 처
리했을 경우에 미처리 세포 및 으로 처리한 세포와 비교해서 , VA-lip siRNArandom　 현저한 
콜라겐 생산 억제를 확인할 수 있었다.
도 13A 도 14
[0193] 실시예 줄기세포의 증식 분화용 스페이스의 중요성< 5> ·
[0194] 활성화간별세포 를 여러 가지의 밀도의 간전구 세포와 공동 배양하여 간전구 (aHSC) , 
세포의 분화에 세포 주위의 스페이스의 유무가 주는 영향을 검토했다 간전구 세포로는 상. 
기 실시예 로 얻은 표지 래트 간 줄기세포를 로는 래트로부터 채취한 < 2> GFP , aHSC SD 
를 배양하여 회 계대 한 것을 각각 이용했다 는 이하와 같이 채취 배양했다 중HSC 1 . aHSC · . (
략 배양 일째에 계대를 실시해 상기 세포를 본 실험에 이용했다) 5 , .
[0195] 세포 배양 인서트 구멍 지름 미국 위에 를 ( 0.4 m, BD Falcon, Franklin Lakes, ) aHSCμ
5×104개 웰 의 밀도로 파종하여 인큐베이터내에서 / (well) 37 , 5% CO℃ 2에서, DMEM 10% ＋
를 이용해 시간 배양했다 파종의 일 후에 간전구 세포를 형 콜라겐으로 코FBS 48 . aHSC 2 , I
팅된 커버 유리 를 넣은 웰 플레이트 에 (IWAKI, Tokyo, Japan) 24 (well) (BD Falcon) 1×104개/
웰 저밀도 또는 (well)( ) 5×105개 웰 컨플루언트 의 밀도로 파종/ (well)( (confluent)) 했다 그 다음에. , 
를 포함한 상기 세포 배양 인서트를 웰 플레이트의 웰 에 삽입하여 인큐aHSC 24 (well) (well)
베이터 내에서 37 , 5% CO℃ 2에서 일간 모두 배양했다 후략10 ( ).
[0196] 공동 배양 일째 항알부민 항체 래빗 폴리클로날10 , ( - , MP Biomedicals)로 면역 염색을 
실시하여 역상 현미경 을 이용해 배의 배율로 알부민 양성 콜로니를 촬영해서 수(Nikon) 100
- 40 -
비특허문헌 이 선행발명이다22) 3 .
19) 담관 결찰 후 일째 개체에 대해 줄기세포 이식 후 시간 후에 투여를 시작하여 번째의 투여가 종료한 시간 후가 28 24 12 24 52
일째인 점식별번호 을 보면 일 간격 즉 하루 걸러 투여한 것을 의미하는 것으로 보이고 이 사건 ( [0103], [0110], [0113]) ‘2 ’, ‘ ’ , 
출원발명의 대응 미국특허공보에도 로 기재되어 있다‘every other day’ . 
20) 그 그는 그의 오기로 보인다 ‘ ’ ‘ ’ .
21) 의 오기로 보인다 ‘sinusoid’ .
22) 간 성상세포 세포 별세포의 다른 이름이다 (HS , ) .
득한 이미지 를 기초로 알부민 양성 콜로니의 면적을 (image) NIS-Elements software(Nikon, 
일본 를 이용해 산출했다 그 결과를 도 에 나타낸다) . 20 .
[0197] 별도 실험에서는 공동 배양 일째에, 10 , Premix WST-1 Cell Proliferation Assay 
일본 을 사용하고 마이크로 플레이트 리더System(Takara, Tokyo, ) , (Bio-Rad Laboratories, 
미국 를 이용해 세포 증식의 측정을 실시했다 그 결과를 도 에 나타냈다Hercules, CA, ) . 21 .
도 20 도 21
[0198] 도 에 나타내는 결과와 같이 를 저밀도로 파종 한 간전구 세포와 공동 배양20 , aHSC , 
하면 간전구 세포는 다수의 알부민 양성의 간실질 세포로 분화하지만 간전구 세포가 컨플, , 
루언트 라면 극히 소수 밖에 간실질 세포로 분화하지 않는 것이 분명해졌다 또(confluent) , . 
한 간전구 세포를 단독 배양했을 경우에는 알부민 양성의 간실질 세포로 분화하지 않았다, , .
[0199] 또한 도 에 나타낸 바와 같이 간전구 세포를 상기와 동일한 밀도로 파종했을 경, 21 , 
우 그 증식능은 저밀도 조건보다 컨플루언트 조건이 낮아지는 것도 분명해졌다, (confluent) .
[0201] 이상의 결과로부터 활성화별세포가 줄기세포의 증식 분화를 유도하는 것 및 줄기세, · , , 
포의 증식 분화에 줄기세포 주위의 물리적 스페이스의 유무가 중요한 영향을 있음이 판명되·
었다 이것은 상기 각 예의 결과를 종합하여 생각하면 콜라겐 감소 물질에 의해서 섬유화 . , , 
조직에서 섬유 조직이 축소하여 줄기세포의 주위에 스페이스가 생긴 결과 줄기세포가 증, 
식 분화하여 정상 조직이 재생하는 것을 나타내는 것이다· . 
- 41 -
별지 2 
선행발명의 주요 내용
초록[ ]
현재 간경변증에 대해 승인된 항섬유화 요법은 없다 본 연구진은 비타민 가 결합된 리. A
포솜을 사용하여 인간 열충격단백질 의 래트 상동체인 에 (heat shock protein, HSP)47 gp46
대한 소간섭 를 간 성상세포 에 전달했다 이 RNA(small interfering RNA, siRNA) (stellate cell) . 
접근법은 이들 세포의 섬유화에 대한 주요 역할뿐만 아니라 비타민 를 흡수 및 저장하는 A
세포의 기능을 이용한 것이다 를 함유한 비타민 접합 리포솜을 사용한 가지 치료. siRNA A- 5
는 간 섬유화를 거의 완전히 회복시켰고, 디메틸니트로사민 으로 (dimethylnitrosamine, DMN)
유도된 간경변 래트에서 그렇지 않은 경우 치명적이었을 생존을 용량 및 기간 의존적으로 
연장시켰다 이러한 회복은 비표적 효과나 선천성 면역반응과는 관련이 없었다. (off-target) . 
수용체 특이 전달은 콜라겐 분비 그리고 - siRNA , CCl4 또는 담관 결찰로 유도된 섬유증의 치 
료에서 비슷하게 효과적이었다. 급성 및 만성 간섬유증 모델을 사용하여 이 접근법의 유효성
을 확인한 결과에서는 인간 간경변증을 역전시킬 수 있는 치료 가능성을 시사했다.
[ 면431 ]
간경변증 또는 섬유증은 모든 형태의 만성 간 손상에서의 최종적인 병리학적 특징으로 전 , 
세계적으로 이환율과 사망률에 많은 영향을 미친다 간 섬유화을 유발하는 주요 세포 유형은 . 
성상 세포로서 순환하는 비타민 를 흡수하여 저장하는 간에 상주하는 (hepatic stellate, HS) , A
동주위 세포이다(perisinusoidal) . 활성산소 중간체 또는 시토카인에 의해 자극받으 면 세포, HS 
는 활성화되며 그러면 증식성 섬유화성 및 수축성 근섬유모세포 로 전환되어 , , (myofibroblast)
프로콜라겐을 합성하고 분비하게 되고 이 프로콜라겐은 프로콜라겐 펩티드에 의해 말단 도, 
메인이 절단된 후 불용성 콜라겐으로 축적되어 섬유증을 유발한다 콜라겐 특이 샤페론. -
인 열충격단백질 은 소포체에서 프로콜라겐이 적절한 삼중나선구조를 (chaperone) 47(HSP47)
형성하도록 하여 콜라겐 분비를 촉진하고 프로콜라겐 합성의 단백질 번역 조절, (translational 
에도 관여한다regulation) .
콜라겐 합성이 억제될 때 동물 및 인간의 간 섬유증이 퇴행될 수 있다는 실증은 섬유증이 
역전될 수 있다는 것을 시사하고 그것은 아마도 매트릭스 메탈로프로테이나제, (matrix 
의 활성에 의한 것일 가능성이 매우 높다 동물 모델에서 콜라겐 합metalloproteinase, MMP) . 
- 42 -
성을 억제하거나 를 활성화하기 위한 다양한 치료적 접근법이 연구되었다 그러나 MMP . 아직 
임상적으로 적용된 치료법은 없으며 그 원인은 주로 특정 분자 및 또는 세포를 특이적으로 , /
표적화할 수 없어서 발생하는 부작용 때문이다. 
은 다양한 콜라겐 유형과 특이적으로 연관되어 있어서 를 사용한 세포 매HSP47 siRNA HS 
개의 콜라겐 분비를 표적화하기 위한 탁월한 후보물질이다 이러한 전략의 특이성을 강화하. 
기 위한 방법으로 본 연구진은 , 비타민 가 결합된 리포솜에 를 넣어 캡슐화하면 비A siRNA , 
타민 흡수 용량이 현저하게 큰 세포가 레티놀 결합 단백질A HS (retinol binding protein, 
에 대한 수용체를 통해 우선적인 표적이 될 것이라고 추론RBP) 했다. 
DMN, CCl4 또는 담관 결찰로 유도한 가지 간경변 동물 모델을 사용 3 한 조직학적 분석에 
따르면 래트 의 상동체 를 암호화하는 에 대한 를 포함한 비타민 , gp46(HSP47 ) mRNA siRNA A-
접합 리포솜 을 정맥내 주입하면 (VA-lip-siRNAgp46) (i.v.) 간 섬유증이 빠르게 회복되는 것이 
확인되었다 세포와 상응하는 세포는 만성 췌장염 및 후두 섬유증과 관련된 섬유증 유발. HS 
에 필수적인 역할을 하기 때문에 이러한 접근은 간 이외의 기관에서 섬유증 상태를 치료하
는 데 가치가 있을 수 있다.
결과[ ]
은 발현 및 콜라겐 분비를 억제한다 siRNAgp46 gp46 
전략 다양한 투여량의 로 세포를 형질전환한 결과 ( ) siRNAgp46A NRK , 명백하게 투여량 의
존적으로 발현이 억제되었으며 에서는 발현이 거의 완전히 억제gp46 50nM 되었다 도 다( 1b). 
음으로 프롤린결합분석법 을 사용하여 가 콜라겐 분, (proline incorporation assay) siRNAgp46A
비를 억제할 수 있는지 조사했다 로 형질전환된 세포의 배양배지 내 새로 . siRNAgp46A NRK 
합성된 콜라겐의 농도는 부모세포 및 무작위로 선택한 로 형질전환된 siRNA(siRNArandom)
세포의 경우에 비해 유의미하게 감소되었다 도 배양된 세포로부터의 콜라(P<0.01)( 1c). NRK 
겐 분비는 시리우스 레드 염료 결합 및 분광광도법으로 측정했다 로 (Sirius red) . siRNAgp46A
처리된 세포의 콜라겐 분비는 처리하지 않은 세포 또는 으로 처리된 NRK NRK siRNArandom
- 43 -
세포보다 유의미하게 더 적었다 도 NRK (P<0.01)( 1d).
면[433 ] 
은 세포의 콜라겐 분비를 억제한다VA-lip-siRNAgp46 pHS 
래트 세포에서 콜라겐 분비에 대한 의 효과를 확인하기 위해 조직 pHS VA-lip-siRNAgp46 , 
배양 플레이트에 침착된 콜라겐의 양을 시리우스 레드 염료결합 및 분광광도법으로 평가했
으며 그 결과 비처리 및 을 처리한 경우보다 유의미하게 더 낮았다, VA-lip-siRNArandom
그림 (P<0.01)( 1i). 

중략 생체 내에서 세포에 대한 의 특이적 전달을 확인하기 위해 우리는 ( ) HS siRNAgp46 , 
을 주입한 처리 쥐의 간에서 분리한 간세포 세포 및 VA-lip-siRNAgp46-Cy5 DMN-5 , HS 
세포에서 사이닌 형광 강도에 대한 분석을 수행하였다 우리는 Kupffer 5(Cy5) FACS . CD163-
양성 세포 세포 또는 (Kupffer ) 알부민 양성 세포 간세포- ( )보다 양성 세포 세포 에서 -SMA- (HS )α
가 현저하게 많이 축적된 것이 관찰되었다 후략siRNAgp46-Cy5 . ( ) 
면[435 ]
의 억제 지속 시간VA-lip-siRNAgp46 gp46 
이 발현에 미치는 효과 지속 시간을 조사하기 위하여 시험관 내에서 래 siRNAgp46 gp46 , 
트 세포를 및 으로 분 동안 처리하고 도 pHS VA-lip-siRNAgp46 lip-siRNAgp46 30 ( 3a, b), 
래트에게 DMN 제 일에 을 정맥내 주입24 VA-lip-siRNAgp46 했다 도 래트 세포 및 ( 3c). pHS 
- 44 -
래트의 간 모두에서 적어도 일 동안 발현이 억제된 반면 도 DMN 3 gp46 ( 3a, c), 
으로 처리한 세포에서는 발현이 억제되지 않았다 도 lip-siRNAgp46 pHS gp46 ( 3b).

주입한 래트의 생존VA-lip-siRNAgp46 i.v. DMN 
일반적으로는 치명적인 처리 DMN 6에 노출된 래트에서 가 생존에 미치는 효과siRNAgp46
를 조사했다 그림 이 일련의 실험에서는 래트에게 을 회 투여하여 ( 3d). DMN 12 간경변을 유
도 제 일 한 후 처치를 시작( 24 ) 했다 보충 도 대조군은 비타민 비타민 결합 리포( 4). PBS, A, A-
솜 또는 을 주에 회 주입했으며 모두 처리 후 , VA-lip-siRNArandom lip-siRNAgp46 1 2 , DMN 
일 이내에 사망했다 처리 래트는 복수 위장출혈 및 흑색변이 발생한 것으로 보아 52 . DMN , 
간부전으로 사망한 것으로 보였다 데이터는 표시되지 않음( ). 대조적으로 을 , VA-lip-siRNAgp46
주에 회 처치한 래트1 2 에서는 생존 시간이 용량(0.1, 0.5, 0.75 mg/kg 의존적으로 연장되었) 
고, 을 처치한 경우의 생존율은 훨씬 더 높았0.75 mg/kg 다 마리의 래트(83.3%, 5/6 ). 0.75 
용량을 mg/kg 주에 회 투여했을 때 생존율은 1 3 100% 마리 였다 도 이 결과는 (12/12 ) ( 3d). 
발현이 처치 후 시간 동안 억제되었지만 일 이내에 회복되었다는 결과gp46 siRNAgp46 72 4
와 일치한다 도 ( 3a, c).
처치 래트에서 에 의한 간섬유증 회복DMN siRNAgp46
처치 래트에서 을 회 투여한 후 제 일 DMN VA-lip-siRNAgp46(0.75 mg/kg) 5 ( 33 ) 
그림 및 콜라겐 염색 그림 으로 간 섬유증을 조사했다 콜라겐 염색에 Azan-Mallory( 4a) I ( 4b) . 
- 45 -
대해 점수화하는 전산화된 이미지 분석을 통해 검출된 섬유화 영역은 대조군 검체에 비해 
처치 래트의 검체에서 유의하게 더 작았다 그림 이러한 결VA-lip-siRNAgp46 (P<0.001)( 4c). 
과는 처치에 의해 제 형 프로콜라겐 및 의 발현이 실질적VA-lip-siRNAgp46 1 TIMP-1 mRNA 
으로 억제된다는 것을 보여준 정량적 데이터와 일치했다 도 유사하게RT-PCR ( 4d). , 
처리 래트에서 하이드록시프롤린 수치는 대조군 래트에 비해 유의하게 더 VA-lip-siRNAgp46 
낮았다 도 처리 래트에서 병리학적 병기 즉 섬유증 및 구조(P<0.001)( 4e). VA-lip-siRNAgp46 , 
적 변화도 명확하게 억제되었다 도 ( 4f).

및 을 회 주입한 래트 제 일 의 간 검체를 VA-lip-siRNAgp46 VA-lip-siRNArandom 5 ( 33 ) gp46
에 대해 염색하여 가 간의 발현에 미치는 효과도 조사했다 양성으로 염색siRNAgp46 gp46 . 
된 영역 적색 은 전자에서 실질적으로 더 작았다 그림 웨스턴 블롯 분석 결과는 면역조( ) ( 4g). 
직학적 관찰과 일치하여 대조군에 비해 처리 래트에서 밴드의 강도, VA-lip-siRNAgp46 gp46 
가 더 약했다 도 면( 4h).[436 ] 
각각 제 일 및 제 일에 및 처리를 중단한 래트의 제 일 및 44 46 DMN VA-lip-siRNAgp46 47
- 46 -
제 일 간 검체에서 간경변의 가역성을 조사했다 제 일 및 제 일 래트의 검체에서 거의 70 . 47 70
완전히 정상적인 간 구조로 복원된 것이 관찰되어 그림 간 조직의 재생능을 시사( 4i), 했다. 
에 의한 래트 세포의 세포자멸사 유도siRNAgp46 HS (apoptosis) 
이 결과로부터 처리가 세포의 세포자멸사를 유도할 수 있다고 추측했다 siRNAgp46 HS . 
격일로 회 비타민 단독 비타민 결합 리포솜VA-lip-siRNAgp46(0.75 mg/kg 5 ), PBS, A , A , 
또는 을 주입한 처리 래트로부터 제 일에 간 검VA-lip-siRNArandom lip-siRNAgp46 DMN , 33
체를 염색하여 세포자멸사를 측정했다 군당 처리 래트 대TUNEL ( n=3). VA-lip-siRNArandom 
비 처리 래트에서 세포 양성 와 겹치는 영역 내의 양성 VA-lip-siRNAgp46 HS ( -SMA ) TUNEL α
세포가 명백하게 증가되었다 보충 도 온라인 양성 영역 내 양성 세포 보( 5a ). -SMA TUNEL (α
충 도 는 대조군에 비해 처리 래트에서 유의하게 증가되었다5b) VA-lip-siRNAgp46 (P<0.01).
세포 배양 실험에서 세포배양 일 후 으로 형질전환된 래트 세포에서 HS , 3 , siRNAgp46 pHS 
세포자멸사로 염색된 핵은 대조 세포에 비해 더 많았다 보충 도 TUNEL HS ( 5c). siRNAgp46
으로 형질전환된 모든 세포핵의 대략 절반 은 세포자멸사한 것으로 보여 대조 HS (48±12 %) , 
세포에 비해 세포자멸사가 상당히 증가되었다 보충 도 (P<0.01)( 5d). 이러한 결과는 
이 세포의 콜라겐 분비를 억제할 뿐만 아니라 세포자멸사를 통해 섬유화 조직siRNAgp46 HS 
에서 세포를 제거하여 더 이상 콜라겐이 조직에 축적되지 않도록 차단함을 시사HS , 하는 것
이다. 
[ 면437 ]
간 기능에 대한 처치의 효과siRNAgp46 
를 처리한 간경변 래트 제 일 에서 격일 VA-lip-siRNAgp46 ( 33 ) VA-lip-siRNAgp46(0.75 mg/kg, 
로 회 는 노출 동안 상승되었던 혈청 빌리루빈 및 히알루로네이트 가 대5 ) , DMN (hyaluronate)
조군의 간경변 래트에 비해 유의하게 감소되었다 제 일에 처리 래트의 빌리(P<0.01). 70 DMN 
루빈 히알루로네이트 알라닌 아미노전이효소 및 , , (alanine aminotransferase, ALT) 알부민 수
준은 처리에 의해 거의 또는 완전히 정상화VA-lip-siRNAgp46 되었다 보충 도 온라인( 6 ).
- 47 -
처리한 간경변 래트의 간 콜라게나제 활성siRNAgp46 
경화된 간에서 콜라겐 용해 활성을 평가하기 위하여 래트의 간 균질액에서 콜라게 DMN 
나제 활성을 측정했다 또는 을 회 주입한 제 일 처리 래트의 . PBS VA-lip-siRNAgp46 3 ( 29 ) DMN 
간 콜라게나제 활성은 정상 간의 경우만큼 높았으며 으로 회 처리한 제VA-lip-siRNAgp46 5 ( 33
일 후에도 높게 유지되었다 보충 표 및 보충 방법) ( 3 ).
CCl4 유도 간경변에 대한 의 효과 VA-lip-siRNAgp46
래트에게 CCl4를 연속적으로 복강 내 투여하면 주 동안 회 치명적이지 않은 간경변이 (8 16 ) 
발생한다 본 연구진은 이러한 화학적으로 유발된 추가 간경변 모델을 사용하여 . siRNAgp46 
및 의 항섬유화 가능성에 대해 평가하기 위하여 이 간경변 모델에 VA-lip-siRNAgp46 , 
및 을 주에 회 주 동안 투여했다 도 섬유화 부위의 수siRNAgp46 VA-lip-siRNAgp46 1 2 , 3 ( 5a). 
축 도 히드록시프롤린 수준의 억제 도 및 발현 억제 도 와 관련된 ( 5b,c), ( 5d) gp46 ( 5e)
의 효과는 처리 래트의 경우와 본질적으로 동일했다 처리된 간경변 siRNAgp46 DMN . CCl4 
래트에서도 을 처리한 후 빌리루빈과 히알루로네이트 수준이 개선되었다VA-lip-siRNAgp46 
도 ( 5f).
담관결찰 유도 간경변에 대한 의 효과VA-lip-siRNAgp46
본 연구의 양상이 담즙 역류로 인한 만성적인 연속 자극에 의해 유발된 간경변에도 효과
- 48 -
적인지 확인하기 위하여 담관 결찰술 도 을 받은 래트 (bile duct ligation, BDL; 6a) 16에게 
을 투여했다 을 회 주입한 격일 후 제VA-lip-siRNAgp46 . VA-lip-siRNAgp46 5 (0.75 mg/kg, ) 45
일에 관찰한 결과에서 조직학적인 섬유증 개선 도 및 히드록시프롤린 도 혈청 빌( 6b,c) ( 6d), 
리루빈 및 히알루로네이트의 수준 억제 도 가 명확했다 이러한 효과는 동일 제제를 주( 6e) . 1
에 회 연속 주입한 경우 제 일까지 유지되었지만 도 또는 2 67 ( 6f-i), PBS VA-lip-siRNArandom 
처리군에서는 섬유증을 동반한 현저한 담관 증식의 증거가 있어 자극이 지속되었음을 BDL 
보여준다.
면[438 ]
[고찰]
간 섬유증을 치료하기 위한 접근법은 대부분 표적 특이성이 적절하지 못하여 임상적 사용 
에 대한 적합성이 제한되어 있었다 본 연구에서 특이성을 보장하기 위해 사용한 가지 방면. 2
의 전략은 다음과 같다 첫째 콜라겐에 대해 특이적인 샤페론 분자 를 로 표적화: , (gp46) siRNA
하고 둘째 를 콜라겐을 생성하는 간 세포에 특이적으로 전달하도록 비타민 결합 리, , siRNA A-
- 49 -
포솜을 사용한다 이를 통해 . 또는 DMN CCl4 처리로 유도된 래트 간경변 모델 또는 담관결 
찰로 유도된 래트 간경변 모델에서 간의 콜라겐 침착을 해소할 수 있었다 처리 래트. DMN 
에서 처리에 의해 생존이 용량 및 기간 의존적 방식으로 연장되었으며 이는 생siRNAgp46 , 
물학적으로 특이적 효과임을 시사한다 중략. ( )
다양한 간섬유증 동물모델이 연구된 바 있다 모델에서 . DMN 진행성 및 치명적인 섬유증
이 유발되기 때문에 본 연구진은 주로 모델에 초점을 맞추기로 결정했으며 이를 통해 DMN , 
섬유증 해소로 인한 생존 연장을 입증할 수 있었다 이러한 결과는 두 가지 모델 즉. , 치명적
이지 않고 모델보다 경미한 특징의 DMN CCl4 모델과 지속적인 담즙역류 자극으로 만성 간 
경변을 유발하는 담관 결찰 유도 모델을 사용하여서도 확인했다. 세 가지 모델에 걸친 결과의 
일관성은 다양한 유형의 간경변에 대한 본 연구의 접근법의 적용 가능성을 시사한다.
이러한 모델들에서 동물들은 여전히 DMN, CCl4 또는 자극에 노출되었지만 BDL , 
를 회 주입한 후 siRNAgp46 5 섬유증은 퇴행했다 치료 효과에 대해 기초적인 일차 기전으로 . 
추측되는 것은 에 의해 siRNAgp46 콜라겐 분비가 억제되고 그림 콜라게나제 활성에 ( 1c, d, i), 
의해 이미 축적된 콜라겐이 동시에 분해되는 것이다 이 콜라게나제 활성은 . 
를 회 처리하여 섬유화가 거의 완전히 사라질 때까지 정상 간에서와 같은 VA-lip-siRNAgp46 5
정도로 높게 유지되었다 보충 표 이 결과는 일단 세포에서 매트릭스 메탈로프로테이나제( 3). 
가 분비되면 제 형 콜라겐에 결합하여 지속적으로 세포외 매트릭스 관련 풀을 이룬다는 개1
념과 일치한다 또한 고정 부위 콜라겐 손실로 인한 세포의 세포자멸사가 치료 효과의 . ( ) HS 
이차적 기전으로 간주된다 보조 그림 부수적으로 엄밀히는 로 인해 것이어서( 5). , siRNAgp46
는 안 되는 를 처리한 간에서의 프로콜라겐 의 명백한 억제도 그림 , siRNAgp46 I mRNA ( 4d) 
콜라겐을 생산하는 세포가 세포자멸사했기 때문일 수 있다HS .
세 가지 간경변 모델 모두에서 혈청 빌리루빈 및 히알루로네이트의 수준이 개선되어 , 간 
문맥 영역에서 섬유증이 해소된 것을 추가로 입증했다 그러나 처리 래트에서 혈청 알. DMN 
부민과 의 수준은 처리에 의해 크게 개선되지 않았다ALT VA-lip-siRNAgp46 . 제 일에 70 DMN 
처리 래트가 정상적인 간 구조로 회복되었고 그림 혈청 빌리루빈 및 히알루로네이트뿐 ( 4i) 
아니라 혈청 알부민 및 의 수준도 거의 완전히 정상화ALT 된 것으로 보아 이는 진행 중인 , 
처리로 인한 독성효과에 의한 것일 수 있다 보충 그림 따라서 DMN ( 6). 본 연구에서 사용된 
방법은 실제로 간경변을 조직학적 및 기능적으로 역전시킨다. 
- 50 -
이것은 간경변증 치료에 대한 임상 중재 유망성을 강조하는 것이다. 
선행발명의 참고자료 [ ]
도 처치 유도 간 성상세포의 세포자멸사 5d. VA-lip-siRNAgp46 

도 간경화증 래트의 정맥 주사된 의 간 기능에 대한 효과 6. VA-lip-siRNAgp46
표 래트 간 균질화물의 콜라게나아제 활성 3.